¿Se requiere permeabilidad durante la tinción inmunohistoquímica? ¿Por qué?
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¿Cuáles son los requisitos para las secciones durante la tinción inmunohistoquímica?
Tiempo de resolución: 2012-11-28 08:23 [Enlace a este artículo: /ask/show-21875.html]
¿Cuáles son los requisitos para las secciones durante la tinción inmunohistoquímica?
Pregunta anónima 2012-11-28
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Respuesta: Usuario anónimo Hora: 2012-11-28
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Los cortes deben ser completos, uniformes, planos y sin pliegues.
Los cortes utilizados para la tinción inmunohistoquímica tienen mayores requisitos de calidad y deben ser planos, sin burbujas. , sin pliegues, lo que facilita el lavado durante el teñido y ayuda a que las secciones queden firmemente adheridas. Si las secciones no son planas, puede producirse una tinción desigual después de la tinción inmunohistoquímica, con distintos tonos de color e irregularidades. Si hay burbujas en la rebanada, cuando se hornea la rebanada, el estallido de las burbujas afectará el tejido alrededor de las burbujas y se observarán diferentes tonos de tinción alrededor de ellas. Si hay pliegues en la sección, después de la tinción inmunohistoquímica, habrá diferentes tonos de color en los pliegues. Esto es un falso positivo y puede generar confusión fácilmente.
Los tramos deben quedar firmemente sujetos y se debe utilizar un adhesivo adecuado.
La preparación preliminar antes de la tinción inmunohistoquímica es procesar el nuevo portaobjetos. La superficie del nuevo portaobjetos se ve muy limpia. Algunas personas piensan que se puede utilizar sin ningún procesamiento. para su uso. La superficie de los portaobjetos de vidrio recién enviados está cubierta con una capa de sustancia similar a la grasa. Si no se trata, será extremadamente perjudicial para la fijación de las secciones. Nuestro enfoque es: remojar los portaobjetos nuevos en una solución limpiadora de vidrios durante 4 horas o incluso durante la noche, luego sacarlos, enjuagarlos bien con agua del grifo y sumergirlos en alcohol durante más de 2 horas. Sácalos y sécalos para más tarde. usarlos o secarlos. Luego, el portaobjetos se sumerge en una dilución de 3-aminopropil trietoxisilano (se puede diluir 1:50 con acetona o etanol absoluto) durante 10 minutos para siliconar, y luego se lava con sílice dos veces con agua y etanol y se seca antes de usar.
Las rodajas deben hornearse y fijarse firmemente para que puedan soportar la alta temperatura durante la recuperación del antígeno sin que se desprendan fácilmente y sin destruir el antígeno.
Sección aplicada para tinción inmunohistoquímica. Dado que todo el proceso requiere varias etapas de procesamiento, como hervir la solución de recuperación de antígenos durante más de diez minutos durante la recuperación de antígenos, lavar repetidamente con PBS y, en algunos casos, incluso incubar en un refrigerador a 4 °C durante más de diez horas. Por lo tanto, la calidad de las lonchas es muy exigente, especialmente el grado de unión de las lonchas. En el pasado, algunas personas recomendaban que las rebanadas se hornearan a menos de 60 °C durante 30 a 60 minutos y luego se procediera en consecuencia. El resultado fue que las rebanadas se caían gravemente y la tasa de holgura de las rebanadas representaba el 100 %. ¿Durante cuánto tiempo se deben hornear las rodajas? No se pelarán, cumplirán varios requisitos y no destruirán el antígeno. Varios grupos de experimentos[] Diagnóstico P173 creen que lo más apropiado es cocer las lonchas en una estufa de secado a temperatura constante a 60°C durante 2-5 horas. Esto se debe a que el antígeno puede soportar dicha temperatura. El punto de fusión de la parafina que se utiliza generalmente en los departamentos de patología es de aproximadamente 60 °C. Cuando el tejido se sumerge en cera, la temperatura en la caja de inmersión de cera generalmente se ajusta a aproximadamente 65 °C. El tejido a esta temperatura necesita estar en remojo durante más de 2 horas para lograr una completa impregnación de cera. Los antígenos del tejido se han probado a una temperatura de 65°C y los antígenos conservados son resistentes al calor. Además, las rebanadas horneadas después del tiempo anterior quedan firmemente adheridas, los antígenos se conservan bien y la tasa de éxito de la tinción alcanza el 100%, lo que garantiza la puntualidad y precisión del diagnóstico patológico.
Es importante tener en cuenta que tanto si las rodajas se utilizan para diagnóstico como para investigación, se deben teñir lo antes posible después de hornearlas.
Si las secciones no se tiñen durante mucho tiempo después del corte y se almacenan a temperatura ambiente o en un refrigerador que funcione, los antígenos de las secciones desaparecerán gradualmente con el tiempo e incluso pueden producirse falsos negativos. En principio, las secciones frescas se deben teñir inmediatamente y se deben cortar tantas rodajas como se hayan teñido, para conservar tantos antígenos expresados como sea posible.
Los cortes desparafinados deben estar limpios, de lo contrario el resultado final de la tinción inmunohistoquímica se verá afectado.
La cera es insoluble en agua y no se fusiona con otros anticuerpos utilizados clínicamente. Sólo se puede eliminar con reactivos especiales y tratamiento durante el tiempo suficiente. Si la desparafinación no es limpia, quedará una pequeña cantidad de cera en las secciones, lo que causará muchos problemas, como tinción desigual, presencia y ausencia de positivos, dificultad para distinguir la autenticidad de la falsedad y un aumento de la tinción de fondo. Para resolver los problemas anteriores, las secciones deben estar completamente desparafinadas antes de teñirlas. El reactivo que se utiliza actualmente para la desparafinación es principalmente xileno, porque tiene un fuerte poder desparafinado y un tiempo de desparafinado corto. Más popular entre los usuarios. El tiempo de desparafinado varía según la estación del año, la temperatura ambiente y la frescura de los reactivos. Si en verano la temperatura ambiente es alta y el reactivo de desparafinado está fresco, no es necesario que el tiempo de desparafinado sea largo, de 3 a 5 minutos es suficiente. Si en invierno la temperatura ambiente es baja y el reactivo de desparafinado está viejo, es necesario ampliar el tiempo de desparafinado, de 10 a 20 minutos o más. En resumen, la operación debe determinarse según las diferentes estaciones, diferentes temperaturas ambiente y diferentes reactivos. En principio, el tiempo de desparafinado debe ser una eliminación completa, limpia y completa de la cera de las secciones. Para lograr esto, calentar las secciones antes de desparafinar ayudará a cumplir los requisitos anteriores. Por ejemplo: las rodajas cortadas el mismo día se deben teñir después de asarlas durante 2 horas. Las rodajas se deben desparafinar con temperatura. Esto acelerará el proceso de desparafinado. Si las rodajas se cortan con antelación y se hornean, se deben calentar antes. Teñir de 10 a 20 minutos y luego desparafinar nuevamente, para que la velocidad de desparafinación sea más rápida y el efecto sea mejor.