¿Qué es la microscopía diferencial de fluorescencia seca?
La interferencia diferencial se llama DIC en inglés. Es un tipo de microscopio de contraste de fases. Se utiliza para observar células vivas transparentes. Las células vivas transparentes son difíciles de detectar porque son transparentes, por lo que es necesario contrastarlas claramente entre sí en algunos lugares antes de poder observarlas.
La microscopía de fluorescencia utiliza luz con una longitud de onda relativamente corta para excitar grupos fluorescentes teñidos por fluoróforos en células vivas, y luego filtra la luz de excitación para observar la fluorescencia emitida por las células.
La microscopía de fluorescencia de interferencia diferencial es un método de observación que combina la interferencia diferencial y la fluorescencia. Tiene efecto DIC y efecto fluorescente.
El siguiente es el principio de interferencia diferencial:
Los principios físicos de los microscopios DIC son completamente diferentes de los microscopios de contraste de fases, y el diseño técnico es mucho más complejo. DIC utiliza luz polarizada y tiene cuatro componentes ópticos especiales: polarizador, prisma DIC, control deslizante DIC y analizador. El polarizador se monta directamente delante del sistema de condensación de luz para polarizar linealmente la luz. En el condensador se instala un prisma Romas, también conocido como prisma DIC. Este prisma puede descomponer un haz de luz en dos haces de luz (x e y) con diferentes direcciones de polarización, y los dos forman un ángulo pequeño. El condensador alinea los dos haces de luz paralelos al eje óptico del microscopio. Inicialmente, los dos haces de luz tienen la misma fase. Después de pasar por las áreas adyacentes de la muestra, la diferencia de trayectoria óptica entre los dos haces de luz se produce debido al diferente espesor e índice de refracción de la muestra. En el plano focal posterior de la lente del objetivo se instala un segundo prisma Romas, el planeador DIC, que combina las dos ondas de luz en una.
En este momento, los planos de polarización (x e y) de los dos haces de luz aún existen. Finalmente el haz pasa a través de un segundo dispositivo polarizador, el analizador. Antes de que el haz forme una imagen DIC en el ocular, el analizador se orienta en ángulo recto con respecto al polarizador. El analizador combina dos ondas de luz perpendiculares en dos haces con el mismo plano de polarización, provocando que interfieran. La diferencia de trayectoria óptica entre las ondas xey determina cuánta luz se transmite. Cuando la diferencia de camino óptico es 0, no pasa luz a través del analizador; cuando la diferencia de camino óptico es igual a la mitad de la longitud de onda, la luz que pasa alcanza su valor máximo. Así, sobre el fondo gris, la estructura del espécimen muestra una diferencia entre la luz y la oscuridad. Para lograr el mejor contraste de la imagen, la diferencia de la trayectoria óptica se puede cambiar ajustando el ajuste fino longitudinal del control deslizante del DIC. La diferencia de la trayectoria óptica puede cambiar el brillo de la imagen. Ajustar el control deslizante DIC puede hacer que la estructura fina del espécimen presente una imagen de proyección positiva o negativa, generalmente un lado es brillante y el otro lado es oscuro, lo que crea una sensación tridimensional artificial del espécimen, similar a un relieve en mármol.