El artículo con puntuación alta simplemente proporciona información útil sobre la tecnología de "flujo de espectrometría de masas".

Después de publicar 20 artículos, la vida de esta doctora se volvió más emocionante después de cambiar de carrera. Un desafío diario para los doctores: ¡Cómo encontrar el método de clasificación celular adecuado! Seis curvas resuelven el 99% de las dificultades a la hora de ajustar datos ELISA. Le pregunté a mi hermano cómo purificar los cuerpos de inclusión y me dijo... La citometría de flujo, con sus ventajas de multiparámetros, alta resolución y detección rápida, se usa ampliamente en muchos campos de investigación y diagnóstico clínico, especialmente en la investigación en inmunología. El único inconveniente es que la citometría de flujo tradicional puede caer fácilmente en la vergüenza de que "los hombres ciegos sientan el elefante" al examinar poblaciones de células desconocidas. La tecnología de flujo de espectrometría de masas puede resolver muy bien este problema. Mediante el salto en los canales de detección se pueden detectar más de 40 indicadores simultáneamente, logrando una detección más completa de las células. Al igual que los experimentos tradicionales de flujo multicolor, el flujo de espectrometría de masas también requiere una consideración "descomunal" del diseño del panel y "precaución paso a paso" antes del experimento. Como dice el refrán, un plan experimental bien planificado es la clave para obtener datos válidos. Echemos un vistazo juntos al proceso de espectrometría de masas. Al final del artículo, habrá una reunión de intercambio de tecnología de detección múltiple CyTOF/Luminex para experimentar el encanto del flujo de espectrometría de masas en el acto.

Si desea saber más sobre el principio de división de la espectrometría de masas, consulte: División de la espectrometría de masas, una confesión de una segunda generación rica.

Etiquetado de isótopos característicos

La principal diferencia entre la tecnología de espectrometría de masas y la tecnología de flujo tradicional es el uso de elementos metálicos y sus isótopos como marcadores de anticuerpos. Actualmente, como etiquetas se utilizan principalmente elementos de tierras raras, elementos inertes, metales de transición tardía y halógenos. El contenido de estos elementos en las células es muy pequeño y no causará un nivel alto ni afectará las funciones fisiológicas normales de las células. A continuación se muestran los principales isótopos utilizados actualmente como marcadores para procesos de espectrometría de masas:

Estos anticuerpos marcados se pueden utilizar para detectar la expresión y modificación de biomarcadores relacionados con las células, la viabilidad celular, la función celular y el ciclo celular.

En comparación con el flujo tradicional, la interferencia de los canales adyacentes en la tecnología de flujo de espectrometría de masas es mucho menor, pero aún existen fenómenos de desbordamiento y fuga, que se deben principalmente a las siguientes razones:

(1). La pureza del isótopo no es suficiente (impurezas).

②.M 1 se refiere al desbordamiento de canales adyacentes, lo que se denomina sensibilidad a la abundancia. En pocas palabras, es la cola de pico de la masa M y la interferencia de señal de las masas M+1 y M–1.

③.M+16 se refiere a la oxidación causada por la oxidación de isótopos. Por ejemplo, los elementos lantánidos ligeros (139 ~ 160 AMU) interfieren con los elementos lantánidos pesados ​​(155 ~ 176 AMU) debido a la formación de óxidos. En la actualidad, mediante la optimización del sistema experimental, la interferencia de los isótopos de lantánidos que se oxidan más fácilmente se ha reducido a menos del 3,0%. 89y, 102pd, 104pd, 105pd, 106pd, 108pd, 110pd, 113pulg.

(1) Diagrama esquemático de la fuente de señal de interferencia de la tecnología de flujo de espectrometría de masas [1]

Chevrier S y otros utilizaron una microesfera de tinte único para calcular la matriz de fuga entre canales, que se puede utilizar como referencia para la selección del canal. Como se muestra en la Figura B:

(b) Matriz de desbordamiento calculada en base a una sola cuenta teñida. El valor en la diagonal es 1. De forma predeterminada, solo se calcula la fuga para los canales potencialmente afectados, incluido m 1, correspondiente a una pureza isotópica conocida de M+16. El número en la celda representa el porcentaje de elementos en esa fila que se filtran al canal en esa columna. Los números de la última columna representan la cantidad total de señales de desbordamiento y fuga recibidas en el canal correspondiente.

La estrategia básica del diseño del panel

Al igual que el flujo tradicional, para marcadores con diferente abundancia de expresión, se sigue el principio de "coincidencia fuerte y débil", es decir, para marcadores con alta abundancia de expresión, elija una etiqueta de isótopo con sensibilidad baja o media; para marcadores con abundancia de expresión baja, elija una etiqueta de isótopo con alta sensibilidad;

Antígenos con abundancia de expresión baja o desconocida:

Seleccione canales de alta sensibilidad, como 153–176 ln y 209Bi, seleccione un canal que rara vez sea interferido por otros canales; Puede considerar amplificar aún más la señal, como usar anticuerpos secundarios de biotina marcados con elementos metálicos o múltiples anticuerpos con diferentes números de clones para marcar el mismo indicador. Antígenos altamente expresados:

Elija etiquetas de sensibilidad baja (89y, 102–110pd, 113in, 115in) o etiquetas de sensibilidad media (139–65438). Elija un canal que cause poca o ninguna interferencia con otros canales; optimice la concentración de anticuerpos y utilice la concentración de anticuerpos más baja que satisfaga sus necesidades para reducir la interferencia con otros canales.

Además, puede seguir las siguientes reglas:

1. Los antígenos mutuamente excluyentes (como CD4 y CD8) pueden disponerse en el canal de interferencia.

②.* * *Los antígenos expresados ​​(como CD3 y CD4) están dispuestos en canales que no interfieren. Si es inevitable, se puede organizar el siguiente nivel (como CD4) para que afecte al canal de nivel superior (como CD3).

③ Crea un contraste perfecto. Además de los controles necesarios en el experimento, puede configurar un control de masa menos uno (MMO), similar al tradicional FMO (control de fluorescencia menos uno), para determinar la interferencia del canal.

④ Distinguir entre población unicelular y población de células vivas. Los medidores de flujo másico no tienen parámetros FSC/SSC para diferenciar células, por lo que los isótopos de iridio o rodio a menudo se usan como agentes de inclusión de ácidos nucleicos para identificar poblaciones celulares enteras y diferenciar entre adherencias y fragmentos según el contenido de ADN. El cisplatino (platino) es un fármaco de quimioterapia que se une al estado de valencia de las membranas celulares dañadas y se utiliza a menudo para diferenciar entre células vivas y muertas.

Expertos técnicos cara a cara

La "Conferencia de intercambio de tecnología de detección múltiple CyTOF/Luminex 2019" organizada por Bio-Techne se llevará a cabo en Shenzhen. Está cordialmente invitado a reunirse con expertos en flujo de espectrometría de masas y tecnología de detección multiplex Luminex para discutir sus principios técnicos, diseño experimental y aplicaciones más recientes.

Primero, el estilo del profesor

El profesor Fu Guo se graduó en la Universidad de Melbourne, Australia. Ex científico del Instituto de Investigación Scripps, EE. UU. Actualmente trabaja en la Facultad de Ciencias de la Vida de la Universidad de Xiamen. Su dirección de investigación es la función y el desarrollo de las células inmunitarias, incluido el desarrollo, la diferenciación, la función y la transducción de señales relacionadas de las células T y B, la interacción entre patógenos y huéspedes, y el seguimiento y tratamiento inmunológico de los tumores. La Universidad de Xiamen tiene el primer medidor de flujo de espectrometría de masas en China, y el profesor Fu Guo es uno de los primeros líderes académicos en China en entrar en contacto con la tecnología de flujo de espectrometría de masas. Hemos acumulado una rica experiencia y datos de investigación, y hemos desarrollado con éxito nuevos reactivos y protocolos en la plataforma de flujo de espectrometría de masas. El Dr. Guo tiene un doctorado de la Universidad de Melbourne, Australia, y es becario postdoctoral en la Organización de Investigación Científica e Industrial de la Commonwealth de Australia. Actualmente es el director técnico de Guangzhou Bai Microbiology Technology Co., Ltd.. De 2005 a 2010, trabajó en la Organización de Investigación Científica e Industrial de la Commonwealth de Australia, dedicándose a la investigación sobre los efectos de los interferones y las citoquinas en el sistema inmunológico y correspondientes. regulación genética. Regresó a China en noviembre de 2010 y se desempeñó como líder de proyecto en el Instituto Provincial de Investigación Veterinaria de Guangdong y en el Instituto Provincial de Monitoreo de Animales de Laboratorio de Guangdong, donde se dedicó a la tecnología de pruebas de salud animal, especialmente las tecnologías xMAP y xTAG de Luminex para pruebas de salud animal. Después de regresar a China, * * * solicitó 52 patentes de invención nacionales, 11 patentes PCT internacionales, autorizó 32 patentes de invención nacionales (incluidas 17 patentes relacionadas con la tecnología Luminex) y publicó 32 artículos SCI (9 patentes relacionadas con la tecnología Luminex). Segundo, horario

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Hora: 2065 438 + 26 de mayo de 2009 Ubicación: Shenzhen Bolin Sheraton Hotel IV. Regístrese para consulta.

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Tema: Biotecnología, antígenos mutuamente excluyentes,* **Antígeno expresado, células muertas. , interferencia oxidativa, desbordamiento, etiquetado de isótopos característicos, espectrometría de masas, platino, rodio, iridio.