¿Cuál es el procedimiento para la evaluación toxicológica de la seguridad alimentaria? ¿Cómo funcionó el experimento de Ames?
Existen dos métodos convencionales de prueba de Ames: prueba puntual y prueba de estimulante en placa. Las operaciones específicas son las siguientes:
1. la prueba de crecimiento bacteriano Vierta 0,1 ml del líquido bacteriano cultivado en el agar blando superior que se ha derretido y se mantuvo a aproximadamente 45 °C. Agregue 0,3 ml-0,4 ml de la mezcla S9 para la activación del S9. Mezcle inmediatamente y viértalo en el fondo. placa, nivelar y concentrar.
Sujete el borde del papel de filtro redondo esterilizado con unas pinzas de aguja esterilizadas, sumerja el papel en la solución de prueba o tome directamente el objeto de prueba sólido y péguelo en la superficie del medio de cultivo superior. Haga controles de disolvente y controles positivos al mismo tiempo y péguelos en las posiciones correspondientes de la placa.
Invertir la placa de Petri en una incubadora a 37°C durante 48 horas. Si crece un círculo denso de colonias en la periferia del papel, es positivo; si las colonias están dispersas y la densidad es similar a la regresión espontánea, es negativo.
3. Prueba de dopaje en placa:
Agregue una cierta cantidad de solución de muestra y 0,1 ml de solución de bacterias de prueba al agar blando superior y agregue 0,3 ml-0,4 ml de S9mix para la activación metabólica. . Después de revolver, viértalo rápidamente en la placa base para que cuaje.
Realizar controles negativos y positivos al mismo tiempo, con 3 paralelos para cada tratamiento. Las muestras generalmente tienen de 4 a 5 dosis. Se comienza con un rango de dosis más amplio y, cuando hay resultados positivos o se sospecha que son positivos, se establecen relaciones dosis-respuesta dentro de un rango de dosis más estrecho. Mismo entrenamiento que el anterior.
La relación entre el número medio de colonias revertidas en cada placa de Petri y el número medio de colonias que revierten espontáneamente en cada placa de Petri de control negativo con la misma dosis es la relación de mutagénesis (RM). Si el valor de RM es ≥2, existe una relación dosis-respuesta y el fondo es normal, se determina que es mutagénico.
Datos ampliados:
1. Proyectos experimentales de evaluación toxicológica de seguridad alimentaria;
Fase 1: prueba de toxicidad aguda, proyectos de prueba:
1. La dosis letal oral (LD50) se determina mediante el método de Horn, el método de unidades de probabilidad o el método de Kohler. Si la dosis de 10 g/kg de peso corporal no causa la muerte, no es necesario determinar la DL50.
2. Si es necesario, realice una prueba de alimentación durante siete días. Los dos proyectos anteriores utilizaron ratones o ratas de dos géneros respectivamente.
La segunda etapa: prueba de toxicidad acumulativa y mutagenicidad, elementos de prueba:
1. Se utilizaron ratas o ratones de ambos sexos, con 20 ratas por grupo.
2. Método de prueba de veinte días. Se utilizaron ratas o ratones de ambos sexos, con 10 machos y 10 hembras en cada grupo de dosis. Elija uno de los dos métodos anteriores.
La tercera fase: pruebas de toxicidad subcrónica (incluyendo reproductiva y teratogenicidad) y pruebas metabólicas. Los elementos de la prueba incluyen:
Prueba de alimentación de 1,90 días.
2. Experimentos de alimentación y cría.
3. Test de teratogenicidad de la alimentación.
4. Prueba de teratogénesis tradicional.
Fase 4: Prueba de toxicidad crónica (incluida la carcinogenicidad), elementos de prueba:
La prueba de toxicidad crónica de dos años y la prueba de carcinogenicidad se pueden combinar en una prueba con animales. Se utilizaron ratas o ratones machos y hembras.
2. Requisitos experimentales para la evaluación toxicológica de la seguridad alimentaria:
1. Todas las sustancias químicas nuevas creadas en China generalmente deben pasar por cuatro etapas de prueba. Especialmente si la estructura química sugiere toxicidad crónica o potencial cancerígeno, la producción es grande, el área de uso es amplia y hay muchas oportunidades de ingestión, se deben llevar a cabo las cuatro etapas de los experimentos.
2. Cualquier derivado cuya estructura química sea básicamente la misma que la de una sustancia conocida (que haya pasado la evaluación de seguridad y esté permitida su utilización por los usuarios) puede ser evaluado por expertos pertinentes en función de los resultados de la primera. , pruebas de segunda y tercera fase para determinar si es necesario determinar si es necesario un ensayo de fase 4.
3. Para sustancias químicas que se copian en China y tienen cierta toxicidad, si la mayoría de los países han permitido su uso en los alimentos y hay evidencia de seguridad, o la Organización Mundial de la Salud ha anunciado la ingesta diaria permitida por persona. persona, cantidad de entrada (ADI, en lo sucesivo denominada cantidad diaria) y la unidad de producción puede demostrar que las propiedades físicas y químicas, la pureza, la composición de impurezas y el contenido de nuestros productos son consistentes con los productos extranjeros, las pruebas de primera y segunda fase se puede realizar primero.
Si los resultados de la prueba son consistentes con productos extranjeros similares, la prueba ya no continuará y se podrá realizar la evaluación. Si de la evaluación se obtiene el permiso para su uso en alimentos, se fijará una cantidad diaria. Si la calidad del producto o los resultados de las pruebas no coinciden con los datos o productos extranjeros, se debe realizar la tercera fase de pruebas.
Fuente: Enciclopedia Baidu - ¿Prueba de Ames? Enciclopedia Baidu: Evaluación de toxicología de seguridad alimentaria