principio de incorporación de brdu

El principio de la incorporación de brdu es que después de agregar brdu al medio de cultivo, se puede utilizar como materia prima para la replicación del ADN celular. Después de dos ciclos celulares, el ADN que contiene BrdU en ambas hebras individuales. la célula representará la mitad, lo que reflejará Debería aparecer como una única mancha clara en el cromosoma.

Si ha pasado por tres ciclos, aproximadamente la mitad de los cromosomas tendrá dos monómeros teñidos de claro, y la otra mitad será uno oscuro y otro claro. Si la célula sólo ha pasado por un ciclo, ambos monómeros quedarán profundamente teñidos. Contando la proporción de cada fase en la fase de división, se puede calcular el valor del ciclo celular.

El ciclo celular se refiere al tiempo que recorre una célula durante una generación. Desde el final de una división celular hasta el final de la siguiente división hay un ciclo. El ciclo celular refleja la tasa de proliferación celular. La fotografía a intervalos se puede utilizar para determinar el ciclo de una sola célula, pero no puede representar el ciclo de una población celular. Por lo tanto, a menudo se utilizan otros métodos para medir el ciclo poblacional. El principio de incorporación de brdu es el método de medición del ciclo celular.

Pasos de operación de Brdu:

1. Cuando las células crezcan hasta la fase exponencial, agregue BrdU al medio de cultivo para lograr una concentración final de 10 μg/ml.

2. Añadir colchicina a las 44 horas de forma que cada ml contenga 0,1μg.

3. Después de 48 horas, digerir de forma rutinaria las células en un tubo de centrífuga. Tenga en cuenta que las células flotantes en el sobrenadante del cultivo también deben recogerse en el tubo de centrífuga.

4. Preparación cromosómica convencional (ver Parte 3: Tecnología cromosómica).

5. Coloque el portaobjetos de cromosomas en la tapa de un baño de agua a 56°C, cúbralo con solución 2×SSC e irradíelo con luz ultravioleta a una distancia de 6 cm de la lámpara ultravioleta durante 30 minutos. .

6. Deseche la solución 2×SSC y enjuague con agua corriente.

7. Teñir con solución de Giemsa durante 10 minutos, aclarar con agua corriente y secar.

8. Examina 100 fases de división bajo el microscopio y registra el índice de división de la primera, segunda, tercera y cuarta etapa celular.

¿Referencia del contenido anterior? Enciclopedia Baidu-BrdU