Radioinmunoensayo
Principios básicos:
En el experimento de radioinmunoensayo, el exceso de antígeno marcado *Ag y el antígeno no marcado Ag (es decir, el antígeno que se va a probar) compiten con una pequeña cantidad de anticuerpo (Ab ) para encuadernar.
Si la radiactividad del conjugado probado (*Ag-Ab) es alta, significa que la concentración del analito es baja.
Si la radiactividad del conjugado probado es baja, esto significa que la concentración del analito es alta. Analizando la curva estándar, se puede calcular la concentración del analito.
En 1960, los académicos estadounidenses Yalow y Bellson establecieron un método de radioinmunoensayo que se utilizó por primera vez para medir el contenido de insulina en el plasma de pacientes diabéticos. Se trata de un gran avance en la legislación china en los campos de la medicina y la biología, y abre una nueva era en la historia de las pruebas médicas. Permite la cuantificación precisa de sustancias de importancia biológica importante que originalmente se consideraban demasiado pequeñas para ser medidas, abriendo así una nueva manera de descubrir aún más los misterios de la vida y permitiendo a las personas volver a comprender la bioquímica de algunos fenómenos de la vida a nivel molecular. nivel y base fisiológica posible. En los 30 años siguientes, el rápido progreso de la ciencia endocrinológica demostró plenamente la enorme fuerza impulsora de esta tecnología de análisis de ultratrazas. En 1977, el inventor de esta tecnología ganó el Premio Nobel de Biomedicina. Esta nueva tecnología penetró rápidamente en otros campos de la ciencia médica, como la virología, la farmacología, la hematología, la inmunología, la medicina forense, la oncología y otras disciplinas relacionadas con la biología médica, como la agricultura, la ecología y las ciencias ambientales. Las sustancias analizadas mediante radioinmunoensayo se han extendido desde las hormonas a casi todas las sustancias biológicamente activas. Nuestras investigaciones sobre radioinmunoensayo comenzaron en 1962 y rápidamente se han desarrollado y popularizado, impulsando enormemente el progreso de la biomedicina en nuestro país. (1) Ventajas del RIA
El radioinmunoensayo tiene muchas ventajas que otros métodos de análisis no pueden igualar. No sólo tiene una alta especificidad de reacción inmune, sino que también tiene una alta sensibilidad de medición radiactiva, por lo que puede medir con precisión varias cantidades extremadamente pequeñas de sustancias inmunoactivas.
1. El límite de detección de los métodos generales de análisis químico con alta sensibilidad es de 10 ~ 10 g, mientras que el RIA suele ser de 10 (nanogramos, ng), 10 g (picogramos, pg) o incluso 10 g (nanogramos, fg). ), 10g.
2. Fuerte especificidad Dado que la especificidad de la reacción inmune antígeno-anticuerpo es muy fuerte, el objeto de detección debe ser el antígeno correspondiente. Los buenos anticuerpos específicos pueden reconocer sustancias con estructuras químicas muy similares e incluso estereoisómeros.
3. Ampliamente utilizado. Según estadísticas incompletas, al menos 300 sustancias biológicamente activas han establecido RIA. Se puede aplicar al análisis de casi todas las hormonas (incluidos péptidos y esteroles), así como a diversas proteínas, antígenos tumorales, antígenos virales, antígenos bacterianos, antígenos de parásitos y algunas moléculas pequeñas (como nucleótidos cíclicos) y análisis de fármacos. (como digoxina y glucósidos digitálicos), y la gama de aplicaciones continúa ampliándose. En los últimos años, debido al tremendo desarrollo de la tecnología de preparación de anticuerpos a partir de haptenos de moléculas pequeñas, se espera que se puedan establecer métodos RIA adecuados para casi todas las sustancias biológicamente activas siempre que su contenido no sea inferior al límite de detección de RIA.
4. Funcionamiento sencillo. RIA requiere solo unos pocos tipos de reactivos y se puede convertir en un kit. El procedimiento de adición de muestras es simple, se puede analizar una gran cantidad de muestras a la vez y el consumo de muestras es pequeño; el tiempo de reacción no es largo; la medición y el procesamiento de datos son fáciles de automatizar; y no presenta ningún riesgo de radiación para los pacientes.
(2) Desventajas de RIA
1. La reacción inmune solo puede detectar sustancias con actividad inmune, pero no se pueden detectar sustancias biológicamente activas que han perdido actividad inmune. Por lo tanto, los resultados del RIA pueden no ser consistentes con los resultados del bioensayo.
2. Debido al uso de reactivos bioquímicos, su estabilidad se ve afectada por muchos factores, y se requiere un conjunto de medidas de control de calidad para garantizar la fiabilidad de los resultados.
3. La sensibilidad está limitada por el principio de funcionamiento del método en sí y algunas sustancias de contenido extremadamente bajo en el cuerpo no se pueden medir.
4. Debido a que la radioinmunidad es una reacción competitiva, ni la sustancia medida ni la sustancia estándar pueden participar en la reacción, y el valor medido es una cantidad relativa en lugar de una cantidad absoluta.
5. Hay problemas como la radiación y la contaminación.
Aunque RIA tiene las deficiencias anteriores, después de todo es una tecnología avanzada para el análisis cuantitativo. Con el avance de la ciencia y la tecnología, la tecnología de radioinmunoensayo se desarrollará de manera más amplia y profunda.