Pasos básicos para la bioproducción

Preparación de portaobjetos temporales de células epidérmicas de cebolla

Cuatro suministros experimentales

Gotero, gasa, pinzas, papel absorbente, portaobjetos de vidrio, cubreobjetos , agua, hojas de afeitar, solución de tinte (solución de yodo)

Cinco materiales experimentales

Células epidérmicas de cebolla, otros materiales biológicos de interés

Seis pasos experimentales

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1. Limpiar diapositivas y cubreobjetos (animación)

2. Deja caer una gota de agua en el centro del tobogán (animación) (Figura zx-21)

3. Use una cuchilla para cortar un cuadrado de aproximadamente 1 cm2 en la piel interna de la cebolla (preste atención a la seguridad al usar la cuchilla) y use pinzas para arrancar la piel interna de la cebolla (animación) (Figura zx-22)

4. Coloque la epidermis interna en agua clara sobre un portaobjetos de vidrio y extiéndala (animación) (Figura zx-23)

5. Cubra lentamente el cubreobjetos comenzando desde un lado sin burbujas (animación) (Figura zx-24)

6. Coloca una gota de solución colorante en un lado del cubreobjetos (animación)

7. Luego use papel absorbente para absorber el exceso de solución de tinte del otro lado para teñir las células epidérmicas de la cebolla de manera uniforme (animación)

8. Observar bajo un microscopio. (Figura zx-25)

Células de cebolla teñidas (mostrando núcleos celulares) (Figura)

Precauciones al usar el microscopio

1. Al mover el microscopio, sostenga el brazo del espejo con una mano y la base del espejo con la otra, manteniendo ambos brazos cerca de la pared torácica. Nunca lo levante con una mano en ángulo ni lo mueva hacia adelante y hacia atrás para evitar que la lente u otras partes se caigan.

2. Al observar muestras, el microscopio debe mantenerse a cierta distancia (5 cm) del borde de la mesa experimental para evitar que el microscopio se vuelque y caiga al suelo. El ángulo de inclinación entre el pilar del espejo y el brazo del espejo no debe exceder los 45 grados y debe restablecerse inmediatamente después de su uso.

3. Al usarlo, debe seguir estrictamente los pasos, estar familiarizado con el rendimiento de cada componente del microscopio y dominar la relación entre la dirección de rotación de las perillas de ajuste grueso y fino y la elevación y descenso del cilindro de la lente. Al girar la perilla de ajuste aproximado hacia abajo, sus ojos deben estar enfocados en la lente del objeto.

4. Al observar muestras temporales con líquido, se debe utilizar una lámina protectora y no se pueden utilizar juntas basculantes para evitar que el líquido contamine la lente y el microscopio.

5. Las perillas de ajuste grueso y fino deben usarse juntas. La perilla de ajuste fino no se puede girar excesivamente en una dirección. Al ajustar el enfoque, observe cómo el cilindro de la lente desciende desde el costado para evitar aplastar la muestra y la lente.

6. Al observar muestras con un microscopio monocular, ambos ojos deben abrirse al mismo tiempo. El ojo izquierdo se usa para observar la imagen del objeto, el ojo derecho se usa para dibujar, la mano izquierda se usa para ajustar el enfoque y la derecha. La mano se utiliza para mover la muestra o dibujar.

7. Está prohibido desenroscar o reemplazar oculares, lentes objetivos, condensadores y otras piezas a voluntad.

8. Si hay suciedad en las partes ópticas del microscopio, puede utilizar papel de limpieza de lentes o un paño de seda para limpiarlo. No lo limpie con los dedos, papel grueso o pañuelo para evitar daños a la superficie del espejo.

9． No se permite que todos los reactivos y medicamentos químicos corrosivos y volátiles, como yodo, soluciones de etanol, ácidos, álcalis, etc., entren en contacto con el microscopio. Si se contaminan accidentalmente, deben limpiarse inmediatamente. No retire el ocular arbitrariamente para evitar que caiga polvo en el tubo de la lente.

10. Después de usar la lente de aceite para observar la muestra, limpie la lente de aceite y el portaobjetos con xileno para evitar que otros cristales del objetivo se manchen con aceite de cedro. El xileno es tóxico, así que lávese las manos inmediatamente después de su uso.

11． Una vez completado el experimento, saque el portaobjetos de vidrio, limpie la lente con papel limpiador de lentes y luego aléjelo. No puede estar opuesto al orificio de la luz. Envuélvalo en tela de seda y vuelva a colocarlo en la caja del espejo. Nunca exponga el microscopio a la luz directa.

Precauciones importantes para las operaciones de microfotografía

1. Ajuste del dispositivo de microfotografía por parte del fotógrafo: incluido el ajuste de la distancia interpupilar entre los dos oculares y la corrección del error refractivo personal. El primero se refiere a ajustar la distancia entre los dos oculares de acuerdo con la distancia interpupilar del individuo, tirando del ocular o girando el tornillo de ajuste de la distancia interpupilar. Al corregir la refracción, el anillo de ajuste de dioptrías en el tubo del ocular debe girarse de modo que la "cruz" en el centro del campo de visión del objetivo se ajuste de una línea simple a una línea doble para lograr una claridad completa, y las líneas izquierda y Los ojos derechos deben ajustarse por separado. Todo fotógrafo no debería saltarse este paso.

2. Selección de diferentes combinaciones de lentes objetivo y oculares fotográficos: Además de la función de aumento, los oculares fotográficos no tienen función de resolución espacial. Sólo la lente objetivo tiene resolución espacial. En condiciones normales, para secciones de tejido con un espesor inferior a 20 μm, debe intentar elegir un objetivo de mayor aumento. Por ejemplo, si desea ampliar el objeto real 50 veces, elija la combinación de objetivo "20×" y ". Ocular de 2,5×". La claridad será mejor. Es más alta que la combinación de lente objetivo de "10×" y ocular de "5×". Sin embargo, también se debe tener en cuenta el grosor del corte y la especificidad de la muestra a observar, por ejemplo, al observar fibras nerviosas o vasos sanguíneos serpenteantes en cortes congelados con un grosor de más de 30 μm, debido a la mayor profundidad focal. de la lente objetivo de menor aumento, existe un problema, ya que favorece la observación y el análisis continuo de imágenes de nervios o vasos sanguíneos que no se ejecutan en el mismo plano desde diferentes profundidades, niveles o ángulos. En este caso, también puedes disparar varias veces con diferentes combinaciones de objetivos y oculares, y finalmente elegir el que tenga mejor efecto.

3. Problemas con el control y uso del condensador: Los fotógrafos con menos experiencia a menudo no tienen la capacidad de ajustar la altura del condensador y no saben si la fuente de luz se desvía del centro del campo de visión. vista. Muchas personas sólo realizan el llamado "enfoque hacia arriba" entre la lente objetivo y la sección de tejido, pero no realizan el "enfoque hacia abajo" entre el condensador y la sección de tejido. Por supuesto, no pueden obtener la película de imágenes de mejor definición. . Los pasos de operación del método de iluminación Kohler son los siguientes: ① Reduzca el diafragma de campo al mínimo para que el orificio pasante de la lámina del diafragma presente su imagen octogonal ② Gire los tornillos de centrado izquierdo y derecho debajo de la platina de película con ambas manos para; haga que la imagen del diafragma sea consistente con los círculos centrales del campo de visión se superponen para corregir la trayectoria óptica; ③ ajuste la altura del condensador para hacer que la imagen de apertura octogonal sea borrosa y clara, es decir, "enfoque hacia abajo"; la apertura al marco de 135 cuadros (refiriéndose al cuadro negativo de tipo 135 convencional, 24 mm × 36 mm) periferia de la imagen. Vuelva a ajustar la altura del condensador hasta que la imagen de apertura sea la más clara. Cada vez que se cambia la ampliación, se deben repetir los pasos de ajuste anteriores.

4. Mejorar el contraste fotográfico: la calidad del contraste de la estructura del tejido ciertamente depende de la calidad de la tecnología de preparación del tejido. Este es un paso importante para mejorar la calidad de la fotomicrografía. Sin embargo, en general, para compensar la falta de contraste en el corte, a menudo se pueden adoptar las siguientes medidas correctivas: ① De acuerdo con el valor de apertura numérico en la lente del objetivo, es decir, el valor NA, ajuste el condensador diafragma de apertura en consecuencia. Generalmente, los objetivos de buena calidad están marcados no sólo con el aumento sino también con el valor NA. Cuanto mayor sea el valor NA, mayor será la resolución espacial. ② Si después de ajustar el dial de valor NA de esta manera, el contraste de la imagen aún es insuficiente debido a una mala preparación del tejido, el valor NA del diafragma de apertura del objetivo se puede reducir adecuadamente. Por ejemplo, una lente de objetivo de 10x se puede ajustar a 0,19. , etc. ③ Si el contraste de la imagen aún no es bueno después de las medidas anteriores, puede reducir el diafragma de campo de 135 (refiriéndose al formato de fotografía convencional de 135 de 24 mm × 36 mm) desde fuera del marco hasta dentro del marco, y luego expandir el Campo de visión en el cuarto oscuro. Por supuesto, las dos últimas medidas mencionadas anteriormente son sólo un remedio ligeramente modificado.

5. La fotografía con bajo aumento es difícil: la fotografía con bajo aumento tiene sus ventajas especiales. Por ejemplo, con un aumento de 1 (objeto) × 2,5 (malla), se obtiene una imagen completa de un lado de un. Se puede tomar un corte de cerebro de rata, lo que brinda una descripción general. La distribución de marcadores específicos es clara de un vistazo, pero la lente del objetivo de bajo aumento tiene baja resolución y larga profundidad focal, lo que dificulta el uso de espirales de ajuste fino para lograr un enfoque preciso. . Para evitar diferencias individuales en la visión, se deben seguir tres pasos: enfoque insuficiente, enfoque excesivo y enfoque correcto. No se debe repetir el enfoque.

6. Uso de lentes de inmersión en aceite: las lentes de objetivo 100× son en su mayoría lentes de inmersión en aceite. Sin embargo, las lentes a menudo se dañan después de su uso porque no se limpian. La alternativa es añadir agua ultrapura o agua bidestilada gota a gota, y el efecto observado no es muy diferente al del aceite de cedro. Dado que la distancia entre el objetivo de 100× y el corte es muy corta, es fácil dañar el objetivo. Primero debe enfocar con el objetivo de 40×, luego cambiar al objetivo de 100× y girar suavemente el enfoque. -tornillo de sintonización al foco. Para evitar daños a la lente, las nuevas lentes de objetivo de 100× suelen tener un dispositivo de resorte, que puede hacer que la lente se expanda y contraiga ligeramente para evitar daños.

7. Otros asuntos que requieren atención: ① De acuerdo con la regla general, la película de color debe agregarse con un filtro LBD (conversión de temperatura de color) y la película en blanco y negro debe agregarse con un filtro IF550 (verde). El filtro LBD puede lograr la mejor compensación de temperatura de color para películas en color con luz diurna, mientras que el filtro IF550 puede acercar la sensibilidad espectral de las películas en blanco y negro a la del ojo humano. Aunque algunas personas piensan que el filtrado no es necesariamente necesario, porque la fotografía depende de la sensibilidad química de la película y no depende de la percepción intuitiva del campo de visión de los ojos de las personas, es mejor agregar un filtro.

②La selección del tiempo de exposición también es una cuestión a la que se debe prestar atención. Se sabe que existen muchas combinaciones diferentes entre los dos parámetros de intensidad de la luz y tiempo de exposición, todas las cuales están dentro del rango de exposición "seguro". Sin embargo, el rango llamado "seguro" no equivale a las mejores condiciones. por lo que el autor cree que limitar el tiempo de exposición sigue siendo muy necesario. La razón es que la sensibilidad química de la película tiene ciertas limitaciones. Si el tiempo de exposición de los 36 fotogramas de una película se cambia a voluntad, la diferencia entre los 36 fotogramas. Sin embargo, la película se revela en las mismas condiciones e inevitablemente habrá algunas diferencias. Según la experiencia del autor, el tiempo de exposición generalmente se limita a 0,5 a 1 s y el efecto de imagen negativa es mejor. ③ La estructura a fotografiar debe colocarse en el centro del campo de visión, porque el tiempo de exposición medido por el dispositivo de exposición automática se basa en el área central del campo de visión, y cuanto más se desvía del centro área, más inexacta será. A veces, para tener en cuenta la relación estructural y la estructura clave no está en el centro del campo de visión, se puede utilizar el método de exposición puntual. ④ Si necesita tomar varias fotografías de la estructura en un corte y luego unirlas, se puede proporcionar una llave de bloqueo en el instrumento de microfotografía New Vanox, que ayudará a resolver este problema para que se puedan tomar varias fotografías de la misma estructura juntas. El tiempo de exposición de cada cuadro es el mismo y luego, al revelar las fotografías, este conjunto de fotografías se coloca en el revelador y fijador al mismo tiempo.