Introducción a la cromatografía en capa fina
2 Referencia en inglés Cromatografía de capa fina (TLC) [Diccionario Landau chino-inglés]
Cromatografía de capa fina [Diccionario bilingüe de ciencia y tecnología del siglo XXI]
Diccionario Landau chino-inglés
Cromatografía en placa [Diccionario médico Xiangya]
Cromógeno de capa fina [Diccionario médico Xiangya]
Descripción general de la cromatografía en capa fina, también conocida como cromatografía en capa fina. Consiste en esparcir uniformemente el adsorbente o portador sobre una placa de vidrio, placa de plástico o placa de aluminio para formar una capa fina uniforme. Después del muestreo y la extensión, el cromatograma obtenido por el mismo método se utiliza con la sustancia de referencia adecuada en la misma placa. En comparación, el escaneo con un escáner de capa fina se puede utilizar para la identificación de medicamentos, la inspección de impurezas o la determinación del contenido. Según el mecanismo de separación, se puede dividir en adsorción, distribución, intercambio iónico, filtración en gel y otros métodos. Es adecuado para la separación e identificación de muestras traza y tiene las características de una velocidad de separación rápida y una alta eficiencia de separación.
4 Definición de cromatografía en capa fina La cromatografía en capa fina es un método de identificación de fármacos o inspección de impurezas [1]. La solución de prueba se coloca en la placa de capa fina y se realiza el cromatograma obtenido después de la inspección. Figura, comparar con el cromatograma obtenido de la misma manera utilizando controles apropiados.
5 Instrumentos y Materiales para Cromatografía en Capa Fina 5.1 ¿Placa de Capa Fina? A menos que se especifique lo contrario, los paneles de vidrio deben estar lisos y planos, libres de goteo de agua después del lavado y secos. Las fases estacionarias más utilizadas son gel de sílice G, gel de sílice GF254, gel de sílice H y gel de sílice HF254, seguidas de tierra de diatomeas, tierra de diatomeas G, alúmina, alúmina G, celulosa microcristalina y celulosa microcristalina F254. Generalmente se requiere que el tamaño de partícula sea de 5 ~ 40 μm.
El recubrimiento de capa delgada generalmente se puede dividir en dos tipos: tipo no adhesivo y tipo adhesivo. En el primero, la fase estacionaria se recubre directamente sobre la placa de vidrio, mientras que en el segundo, se añade una cierta cantidad de aglutinante a la fase estacionaria. Generalmente, se utiliza comúnmente 10~15 de yeso calcinado (CaSO4 · 2H2O calentado a 140 ℃ durante 4 horas). Después de mezclar, agregue la cantidad adecuada de agua y reserve, o use una solución acuosa de carboximetilcelulosa sódica (0,2 ~ 0,5). Se debe utilizar un recubridor para recubrir la fase estacionaria sobre la placa de vidrio en una capa delgada y uniforme que cumpla con los requisitos de espesor.
¿Laminado fino comercial? Se puede dividir en laminados finos ordinarios y laminados finos de alta eficiencia, como laminados finos de silicona, laminados finos de silicona GF254, películas de poliamida, laminados finos a base de aluminio, etc. El tamaño de partícula de las placas de capa fina de alta eficiencia es generalmente de 5 a 7 μm.
5.2 En el dispositivo de muestreo se utiliza comúnmente una microjeringa con un soporte o un tubo capilar cuantitativo, y la posición de muestreo debe ser correcta y concentrada.
5.3 El recipiente de expansión debe utilizar un tubo de expansión TLC de vidrio que sea adecuado para el tamaño de la placa de capa delgada, y la tapa debe estar hermética y el fondo debe ser plano y liso, o tener ranuras dobles.
5.4 Consultar la normativa correspondiente a cada tipo de promotor. Puede detectar manchas rociándolas, sumergiéndolas o fumigándolas con vapores reactivos adecuados.
5.5 El dispositivo de revelado de color requiere que el agente revelador de color y el gas comprimido sean uniformes.
El spray en forma de niebla; el remojo y el desarrollo del color se pueden reemplazar por recipientes de vidrio especiales o por frascos de vidrio adecuados; el desarrollo del color mediante fumigación con vapor se puede reemplazar por un frasco de vidrio de doble tanque o un secador del tamaño adecuado; .
5.6 Dispositivo de observación El dispositivo de observación es una caja negra equipada con luz visible, luz ultravioleta de onda corta (254 nm), luz ultravioleta de onda larga (365 nm) y se pueden conectar equipos de cámara correspondientes para capturar. el cromatograma. La fuente de luz de la caja negra debe tener suficiente iluminación.
6 Métodos de operación de la cromatografía en capa fina 6.1 Preparación de la placa de capa fina ¿Placa de capa fina casera? A menos que se especifique lo contrario, se muele y se mezcla 1 parte de la fase estacionaria y 3 partes de agua en un mortero en la misma dirección. Después de eliminar las burbujas superficiales, se vierte en la recubridora. La recubridora se coloca sobre una placa de vidrio para recubrir (espesor). es de 0,2-0,3 mm), retire la placa de vidrio recubierta con una capa fina, séquela a temperatura ambiente en una plataforma horizontal y luego actívela a 110°C. Comprobar su uniformidad antes de su uso (observable con luz transmitida y luz reflejada).
¿Laminado fino comercial? Generalmente se debe activar a 110 ℃ durante 30 minutos antes de su uso. Las películas de poliamida no requieren activación. La delgada placa de aluminio se puede cortar según sea necesario, pero tenga cuidado de que la capa de silicona en la parte inferior de la delgada placa de aluminio cortada no se dañe. Si se contamina con impurezas en el aire durante el almacenamiento, se puede prelavar en un recipiente para esparcir con un disolvente adecuado antes de su uso, activarlo a 110 °C y colocarlo en un desecador para su uso posterior.
6.2 A menos que se especifique lo contrario, utilice un observador para detectar la muestra en la placa de capa delgada, generalmente en un punto. La línea de base del punto está a 2,0 cm de la parte inferior y el diámetro del punto es de 2 a 4 mm (1 a 2 a 4 mm para placas de capa fina de alta eficiencia). El espacio entre puntos no debe afectar la detección, generalmente de 1,0 a 2,0 cm (las placas de capa fina de alta eficiencia no deben tener menos de 5 mm). Se debe tener cuidado de no dañar la superficie de la lámina al tomar muestras.
6.3 Si es necesario llenar el rodillo desplegable con revelador con antelación, puede añadir una cantidad suficiente de revelador al rodillo. Si es necesario, coloque dos tiras de papel de filtro del mismo alto y ancho que el cilindro en la pared, sumerja un extremo en el agente revelador y cubra la tapa superior para equilibrar el sistema o operar según las normas de cada variedad.
Coloque la placa TLC que contiene la muestra de prueba en el tanque del agente revelador, sumérjala en el agente revelador a una profundidad de 0,5 ~ 1,0 cm desde el fondo de la placa TLC (no sumerja la muestra en el agente revelador), y selle Cubra la parte superior hasta que se despliegue a una distancia de despliegue adecuada (por ejemplo, para una placa de capa delgada de 20 cm, la distancia de despliegue es generalmente de 10 ~ 15 cm; para una placa de capa delgada de alta eficiencia de 10 cm, la la distancia de colocación es generalmente de unos 5 cm), retire la placa de capa fina, séquela y presione. Se inspeccionan las regulaciones de cada variedad.
Se puede expandir en una dirección, es decir, en una dirección, también se puede expandir en dos direcciones, es decir, se puede expandir y sacar en una dirección. Después de que el revelador se haya evaporado por completo, gire el TLC 90 grados y revele con el revelador original u otro revelador. También se puede ampliar muchas veces.
6.4 El método de extinción de fluorescencia se puede utilizar para el desarrollo del color y la inspección de placas de capa fina fluorescentes; para placas de capa fina ordinarias, las sustancias coloreadas se pueden inspeccionar directamente y las sustancias incoloras se pueden inspeccionar mediante métodos físicos o físicos. métodos químicos. El método físico consiste en detectar el color de la fluorescencia y la intensidad de las manchas; el método químico generalmente utiliza reactivos químicos para desarrollar el color e inmediatamente lo cubre con una pieza de vidrio del mismo tamaño para su inspección.
7 Prueba de idoneidad del sistema De acuerdo con los requisitos de cada variedad, se realizó una prueba de idoneidad del sistema de cromatografía en capa fina para garantizar que la sensibilidad de detección, el valor de cambio de relación (Rf) y la eficiencia de separación puntual cumplieran con los requisitos. .
7.1 La sensibilidad de detección se refiere a la cantidad más baja de la sustancia que se medirá en la solución de prueba durante la inspección de impurezas. Generalmente, la solución se diluye varias veces con la solución de control, y la solución de prueba y la solución de control se manchan y desdoblan en las condiciones cromatográficas especificadas, se inspeccionan en la misma placa de capa fina. La primera debe mostrar manchas claras.
7.2 El valor de desplazamiento de la relación (Rf) se refiere a la relación entre la distancia desde la línea de base hasta el centro del punto de desarrollo y la distancia desde la línea de base hasta el extremo frontal del revelador. Al identificar, se pueden comparar los valores de desplazamiento específicos de los puntos principales de la solución de prueba y la solución de referencia, o se pueden usar los valores de desplazamiento específicos para ilustrar las posiciones de los puntos principales o puntos de impureza.
A menos que se especifique lo contrario, el valor de desplazamiento específico (Rf) estará entre 0,2 y 0,8.
7.3 Al identificar la eficiencia de la separación, el cromatograma de una solución de control mixta elaborada a partir de una sustancia de referencia y una sustancia de referencia de fármaco con una estructura similar debe mostrar dos puntos claramente separados. Al elegir un método de inspección de impurezas, puede disolver la sustancia de referencia de impurezas en la solución de control diluida del producto de prueba para hacer una solución de control mixta, o disolver la sustancia de referencia de impurezas en la solución de control del componente que se va a probar para hacer una solución de control mixta, o utilice una solución obtenida después de la degradación adecuada del artículo de prueba. Después de que la solución anterior haya sido manchada y revelada, el cromatograma debería mostrar dos manchas claramente separadas.
8 Métodos de determinación 8.1 Al identificar mediante cromatografía en capa fina, la muestra y la solución de control de la misma concentración se pueden colocar en la misma placa de capa fina, desplegarla e inspeccionarla. El color (o fluorescencia) y la posición (Rf) de los puntos principales mostrados por la solución de control deben ser consistentes con los de la solución de control, y el tamaño y la profundidad del color de los puntos principales deben ser aproximadamente los mismos. O la solución de prueba y la solución de referencia se mezclan en volúmenes iguales y deben aparecer como un punto único y estrecho o los puntos principales de la solución de referencia con una estructura química similar a la solución de prueba se comparan con los puntos principales de la solución de prueba; , y el Rf de los dos debe ser diferente, o se deben mezclar volúmenes iguales de las dos soluciones anteriores y deben aparecer dos puntos claramente separados.
8.2 Comprobación de impurezas Cuando se utiliza TLC para comprobar las impurezas, se pueden utilizar el método de referencia de impurezas, el método de control de autodilución de la solución de prueba o ambos métodos. Los otros puntos de la solución de prueba, excepto los puntos principales, deben ser consistentes con los puntos principales correspondientes de la solución de control de impurezas o la solución de control de impurezas con una serie de concentraciones, o con la solución de prueba de la solución de control autodiluida o La solución de control se compara con una serie de diluciones de concentración y la mancha principal no debe ser más oscura.
Por lo general, se debe especificar el número de manchas y la cantidad de impurezas individuales. Cuando se utiliza una serie de soluciones de control autodiluentes, también se puede especificar la cantidad total estimada de impurezas.
El método de escaneo de capa delgada se refiere a irradiar una placa de capa delgada con luz de una determinada longitud de onda, escanear puntos que absorben luz ultravioleta o luz visible o emiten fluorescencia después de ser excitados, y utilizan el espectro de escaneo y datos de integración para la identificación de medicamentos, inspección de impurezas o determinación de contenido.
A menos que se especifique lo contrario, el método de escaneo de capa delgada puede basarse en las características estructurales y las instrucciones de funcionamiento de varios escáneres de capa delgada y combinarse con circunstancias específicas, se puede seleccionar el método de reflexión, el método de absorción, o el método de fluorescencia, escaneo de longitud de onda dual o escaneo de longitud de onda única. Los métodos de determinación incluyen el método estándar interno y el método estándar externo. Dado que hay muchos factores que afectan los resultados del escaneo de capa delgada, la medición cuantitativa del escaneo de capa delgada debe realizarse en la misma placa que la sustancia de referencia en condiciones que garanticen el número de puntos, la expansión, el escaneo, la medición y el cálculo. de la curva de calibración.