Investigación sobre autofagia: análisis

Recientemente, la investigación de la autofagia se ha vuelto muy popular. Se han comenzado a promover las resistentes a los medicamentos, las apoptóticas y las no apoptóticas.

El título de este artículo es "La ulinastatina reduce la resistencia de las células cancerosas del hígado a la epirrubicina mediante la inhibición de la autofagia", que básicamente puede usarse como plantilla de referencia para la investigación básica sobre la autofagia.

La idea de este artículo es: primero demostrar que la EPI puede inducir la autofagia en las células de cáncer de hígado, y que la ITU puede inhibir esta autofagia; luego, la ITU puede promover la apoptosis inducida por la EPI; Promueve la apoptosis inducida por EPI. Esto demuestra aún más que la ITU funciona a través de la vía de señalización NF-kB. Finalmente, se realizaron experimentos de tumorigénesis.

Cuando miramos la primera figura, básicamente podemos entender qué hace la autofagia.

La investigación sobre la autofagia se puede dividir básicamente en los siguientes niveles:

1. Demuestre que la autofagia está involucrada en el fenotipo de su investigación: ****western detecta LC3, p62; Detección de fluorescencia dual del flujo de autofagia. Observe el fenómeno de la autofagia bajo un microscopio electrónico;

Durante el proceso de autofagia, la LC3 citoplasmática (es decir, LC3-I) hidrolizará un pequeño polipéptido y el polipéptido se convertirá en un tipo de membrana de autofagia (es decir, LC3 -II). La relación LC3-II/I puede estimar el nivel de autofagia.

Sin embargo, el anticuerpo LC3 tiene una alta afinidad por LC3-II, por lo que a menudo provoca falsos positivos. Por lo tanto, la localización subcelular de LC3 se utiliza a menudo para ayudar en los experimentos. Por ejemplo, este artículo utiliza el adenovirus ****mRFP-GFP-LC3 de Hanbio para el análisis.

2. Demuestre que la autofagia juega un papel clave en su fenotipo: * *Agregue el inhibidor de la autofagia 3-MA y el agonista rapamicina, y luego pruebe el fenotipo (función);

Aquí se utilizan dos inhibidores de la autofagia: 3-MA y CQ (cloroquina).

3. Encuentre moléculas que vinculen los fenotipos con la autofagia: * *Detecte vías de autofagia como la vía pI3K, Beclin-1 y los miembros de la familia ATG para ver cuál se correlaciona positivamente con el fenotipo;

p>

4. Moléculas en manipulación genética 3. Detección de autofagia y fenotipo* * * *: Explicar el mecanismo de las moléculas que vinculan la autofagia y el fenotipo;

Esto debe aplicarse a Leyes Keho y experimentos de reciclaje.

...Una hermosa línea divisoria...

Dr. Li Mochou: * * * *La investigación sobre autofagia común es un modelo de este tipo: (Gracias a Hanheng Biotech, el Dr. Cai compiló para nosotros)

En el estudio del fenotipo de autofagia, el adenovirus de Hanheng que contiene la proteína de fusión mRFP-GFP-LC3 se usa comúnmente para infectar células. Al usar MRFP para marcar y rastrear LC3, el debilitamiento de GFP puede indicar la fusión de lisosomas y autofagosomas para formar autofagosomas, es decir, dado que la proteína fluorescente GFP es sensible a los ácidos, cuando la autofagia y los lisosomas se fusionan, la fluorescencia de GFP se apaga, solo rojo En este momento se puede detectar fluorescencia.

Así:

(2014, Kidney International, IF=7.916)

(La herramienta de autofagia utilizada en este experimento es Hanheng Biotech Ad-mRFP- GFP -Adenovirus de doble marca LC3)