¿Qué hace la HPLC? ¿principio? ¿Cómo hacerlo?
HPLC es cromatografía líquida de alta resolución, y su nombre completo en inglés es High Performance Liquid Chromatography. Este método se utiliza como importante tecnología de separación y análisis en los campos de la química, la medicina, la industria, la agronomía, la inspección de productos básicos y la inspección legal.
Usos: La cromatografía líquida de alta resolución es más adecuada para la separación y análisis de sustancias con puntos de ebullición altos, estabilidad térmica deficiente, actividad fisiológica y peso molecular relativo relativamente grande. Por lo tanto, se usa ampliamente en ácidos nucleicos. , péptidos, lactonas, análisis viscosos de hidrocarburos aromáticos cíclicos, polímeros, fármacos, metabolitos humanos, tensioactivos, antioxidantes, pesticidas, herbicidas y otras sustancias.
Principio: la cromatografía líquida de alto rendimiento utiliza líquido como fase móvil y utiliza un sistema de infusión de alta presión para bombear disolventes individuales con diferentes polaridades o disolventes mixtos, tampones y otras fases móviles en diferentes proporciones a un sistema estacionario. Fase Después de que los componentes de la columna se separan, ingresan al detector para su detección, realizando así el análisis y la separación de la muestra.
Método de operación: como se muestra en la siguiente figura, la fase móvil en el depósito de solvente es aspirada por la bomba, mezclada de acuerdo con un gradiente determinado por el controlador de gradiente y luego sale después de medir su presión y. Caudal, se introduce en la válvula de inyección (el dispositivo), pasa a través de la columna de protección y la columna de separación y luego llega al detector para su detección. Los datos son procesados por el equipo de procesamiento de datos o el cromatograma es registrado por el registrador. es recogido por el recolector de fracciones y el líquido residual es recogido por la botella de líquido residual.
Información ampliada:
En la etapa inicial de la cromatografía líquida se utiliza una columna de vidrio de gran diámetro para transportar la fase móvil con una diferencia de nivel de líquido a temperatura ambiente y presión normal, Este método, llamado cromatografía clásica en fase líquida, tiene una baja eficiencia de columna y lleva mucho tiempo (a menudo varias horas). La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se basa en la cromatografía líquida clásica y se desarrolló rápidamente después de la introducción de la teoría de la cromatografía de gases a finales de los años 1960. ?
La HPLC se divide en cromatografía de fase normal y cromatografía de fase inversa según los componentes de la fase estacionaria y la fase móvil.
Cromatografía en fase normal
Utiliza una fase estacionaria polar (como polietilenglicol, fase unida a amino y nitrilo) la fase móvil es un disolvente hidrofóbico relativamente no polar (alcanos como n); (hexano, ciclohexano), etanol, isopropanol, tetrahidrofurano, cloroformo, etc. para ajustar el tiempo de retención de los componentes. A menudo se utiliza para separar compuestos moderadamente polares y altamente polares (como fenoles, aminas, carbonilos, aminoácidos, etc.).
Cromatografía de fase reversa
Generalmente se utiliza una fase estacionaria no polar (como C18, C8) y la fase móvil es agua o tampón, a menudo añadiendo metanol, acetonitrilo o isopropilo; Se pueden utilizar alcohol, acetona, tetrahidrofurano y otros disolventes orgánicos miscibles en agua para ajustar el tiempo de retención. Adecuado para la separación de compuestos no polares y menos polares. RPC es el más utilizado en la cromatografía líquida moderna. Según las estadísticas, representa aproximadamente el 80% de todas las aplicaciones de HPLC.
Referencia: Enciclopedia Baidu-Cromatografía líquida de alta resolución