¿Cuál es la diferencia entre la extracción de plásmidos a pequeña escala y la extracción a gran escala?
Diferencias:
1. El líquido bacteriano requerido es diferente. El extracto grande se utiliza para extraer una gran cantidad de líquido bacteriano, que oscila entre 100 ml y 500 ml, mientras que el extracto pequeño utiliza una pequeña cantidad de líquido bacteriano, normalmente de 1,5 a 5 ml.
2. La pureza es diferente. El kit general contiene más lisozima, alcohol isopropílico (para recuperar ácidos nucleicos precipitados), cloruro que contiene una cierta cantidad de PEG (para recuperar ADN plasmídico) y acetato de amonio que los kits pequeños. Sus funciones y propósitos son beneficiosos para la lisis y la purificación de plásmidos. , por lo que el producto de la extracción grande es mucho mayor que el de la extracción pequeña y la pureza es muy alta.
3. Los requisitos experimentales son diferentes. La minipreparación se usa generalmente para la identificación de plásmidos y experimentos que no requieren alta pureza, mientras que la preparación grande se usa para experimentos que requieren alta pureza, como la extracción de plásmidos a gran escala y la transfección.
Información ampliada:
Los principios básicos de los plásmidos grandes y pequeños son los mismos. Ambos se amplifican en bacterias mediante ciertos métodos (como la lisis alcalina). y luego el ADN se purifica mediante una serie de pasos como la eliminación de proteínas y la eliminación de ARN, y finalmente se extrae el ADN.
Cuatro requisitos para elegir plásmidos (los más utilizados) como vectores:
1) Elegir plásmidos de pequeño peso molecular, es decir, vectores pequeños (1-1,5 kb) → no fácil de dañar, en bacterias También hay muchos números de copias (también hay vectores grandes);
2) Generalmente, los plásmidos relajados se usan para amplificar en bacterias sin restricción, generalmente más de 10 copias, mientras que las estrictas plásmidos <10.
3) Debe haber más de un sitio de corte de enzimas, con espacio para la selección.
4) Debe haber marcadores fáciles de detectar, en su mayoría genes de resistencia a antibióticos, no específicos; Se refiere a múltiples Ampr (pruébelo).
No importa qué vector elija, primero debe obtener la molécula del vector y luego usar las enzimas de restricción apropiadas para cortar el ADN del vector para obtener moléculas que puedan conectarse fácilmente al fragmento del gen objetivo.
Enciclopedia Baidu_Extracción de plásmidos