Volumen de muestra superior a preparación y purificación
Siempre que los clientes preguntan sobre problemas de preparación y purificación, el volumen de carga es el parámetro más preocupante. La cantidad de muestra cargada en la purificación preparativa generalmente se refiere a la cantidad máxima de muestra preparada obtenida para mejorar la eficiencia y reducir el costo de los consumibles en las condiciones de garantizar la pureza y el rendimiento.
Entonces, ¿cuáles son los factores que determinan el volumen de carga para la preparación y purificación? En primer lugar, refinamos aún más el concepto de volumen de carga en: el volumen de carga máximo teórico y el volumen de carga máximo efectivo.
El volumen máximo teórico de carga de muestra se refiere a no considerar factores de separación, sino solo considerar la capacidad del relleno para resistir la muestra. Diferentes cargas cromatográficas tienen diferentes composiciones, diferentes parámetros, diferentes principios de separación y la tolerancia de separación de la muestra por unidad de peso de la carga también es diferente. Aquí tomamos como ejemplo la preparación y purificación de gel de sílice y cargas C18 de fase reversa a base de gel de sílice. Los grupos funcionales en la superficie de estos dos rellenos que tienen el mayor impacto en la separación son los grupos funcionales en la superficie del relleno de gel de sílice. Los grupos funcionales en la superficie del relleno de gel de sílice son los grupos hidroxilo; La superficie del relleno C18 de fase inversa de la matriz de gel de sílice está unida a grupos C18. Por lo tanto, la tolerancia de separación y la unidad del relleno de gel de sílice están directamente relacionadas. El empaquetamiento de C18 de fase inversa de matriz de gel está directamente relacionado con el número de grupos C18 por unidad de relleno. Aquí, normalmente la cantidad de carga máxima teórica de gel de sílice es 1/10 de la cantidad de gel de sílice, y la cantidad de carga máxima teórica de empaquetamiento C18 de fase inversa de matriz de gel de sílice es 1/50 de la cantidad de relleno.
En el proceso de separación real, hay muchos factores que afectan nuestra carga de muestra. Por lo tanto, el volumen de carga de muestra máximo efectivo se usa comúnmente en el proceso de separación real. El volumen de carga de muestra máximo efectivo se refiere a la preparación. volumen finalmente confirmado a través de experimentos. A continuación se explican algunos factores comunes: 1. Separación de la muestra 2. Solubilidad de la muestra.
El impacto de la resolución en la carga de la muestra se basa principalmente en la calidad de la resolución que determina si se sobrecarga la muestra. Cuando la separación entre la sustancia objetivo y las impurezas es muy buena, podemos aumentar el volumen de inyección, es decir, sobrecargar la inyección. A medida que aumenta el volumen de inyección, la separación se hace más pequeña hasta llegar a un punto en el que disminuye el rendimiento y la pureza de la preparación. La purificación se ve afectada. Por el contrario, si la separación no es buena, la cantidad de carga debe reducirse según sea apropiado para cumplir con los requisitos de pureza y rendimiento de la purificación preparativa.
El impacto de la solubilidad en la carga de la muestra se debe principalmente a la calidad de la solubilidad que determina el método de inyección de sobrecarga. Los métodos de inyección de sobrecarga generalmente se dividen en sobrecarga de concentración y sobrecarga de volumen (como se muestra en la Figura 1). La sobrecarga de concentración se refiere a aumentar la concentración de la muestra sin cambiar el volumen de inyección. La forma del pico cambia de una curva gaussiana simétrica a un triángulo, el ensanchamiento del pico es menor y el efecto de separación es mejor. de buena solubilidad de la muestra. Cuando la solubilidad de la muestra es mala, el volumen de inyección generalmente aumenta. Este método de inyección se llama sobrecarga de volumen. Cuando el volumen de inyección excede un cierto volumen de inyección, la altura del pico ya no aumentará y la forma del pico se volverá más ancha y. rectangular. Al mismo tiempo, las muestras con poca solubilidad también precipitarán durante el proceso de separación, lo que provocará que la presión de la columna aumente, lo que nos obligará a reducir la cantidad de carga.
Figura 1. Diferentes métodos de inyección utilizados habitualmente en cromatografía líquida.
Entonces, ¿qué otros factores afectan nuestra carga de muestras durante la separación preparativa? Le invitamos a comunicarse más con nosotros.
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