Proceso de detección de microorganismos funcionales y valor de aplicación.
En el trabajo experimental, para lograr el doble de resultado con la mitad de esfuerzo en el cribado, en general, la recolección y el cribado se pueden realizar de las siguientes formas: 4jis\W} L3
(1) Obtenga cepas relevantes de instituciones de preservación de cepas y seleccione las cepas requeridas. ^5u}
(2) Recoger muestras de la naturaleza, como suelo, agua, cadáveres de animales y plantas, etc., y separarlas y cribarlas. O|gt;lt;I?I
(3) Aislar cepas objetivo de algunos productos de fermentación, como el aislamiento de bacterias productoras de proteasa de la salsa de soja, el aislamiento de bacterias productoras de amilasa o carbohidrasa de la levadura de destilería, etc. . rN$_(m_N
El aislamiento y cribado de cepas bacterianas generalmente se puede dividir en varios pasos: muestreo, enriquecimiento, separación e identificación del producto. 8*4Xa=O f
Primero Sección: Recolección de muestras microbianas Q?7U iTZ
Las muestras bacterianas son extremadamente abundantes en la naturaleza, el suelo, el agua, el aire, las ramas y hojas muertas, las enfermedades de las plantas, los frutos podridos, etc., contienen muchos microorganismos y. el número de especies es muy grande, pero en términos generales, las muestras de suelo contienen la mayor cantidad de bacterias. Debido a que hay nutrientes, aire y agua para los microorganismos, casi todas las cepas necesarias se pueden aislar del suelo y se derivan microorganismos del aire y del agua. del suelo, por lo que las muestras de suelo son generalmente el objetivo de recolección preferido, la mayor cantidad de bacterias en el suelo, la cantidad de bacterias por gramo de suelo tiene el siguiente patrón decreciente: bacterias (108)gt; (106)gt; levaduras (105)gt; algas (104) ) gt; protozoos (103), entre los cuales actinomicetos y mohos se refieren al número de sus esporas, sin embargo, debido a diferentes características fisiológicas, la distribución de varios microorganismos en. El suelo varía según las condiciones geográficas, los nutrientes, la humedad, la textura del suelo y la estación. Por lo tanto, antes de aislar las cepas, se deben recolectar muestras de ambientes y regiones apropiados para fines de aislamiento y detección. Características del suelo 8_8 R$ =V
1. Contenido de materia orgánica del suelo y aireación&;'c1"*8gt;
En términos generales, la materia orgánica del suelo de tierras cultivadas, suelos de jardines y Suelo suburbano Rico en contenido, suficientes nutrientes, el suelo tiene una estructura granular, buena aireación y propiedades saturadas de retención de agua, por lo que los microorganismos crecen vigorosamente y en grandes cantidades, y son especialmente adecuados para el crecimiento de bacterias y actinomicetos en suelos forestales en laderas. con vegetación densa y muchas ramas y hojas muertas, rica en materia orgánica, oscura y húmeda, apta para el crecimiento y reproducción de mohos y levaduras, y el número de microorganismos es correspondientemente pequeño desde la sección longitudinal de la capa del suelo. La capa superior del suelo de 1 a 5 cm se debe a la luz solar, la gran evaporación, la baja humedad y el fuerte efecto de esterilización ultravioleta, por lo que la cantidad de microorganismos es menor que la de la capa de suelo de 5 a 25 cm y el contenido bacteriano en la capa de suelo por debajo de los 25 cm también. Disminuye gradualmente debido a la compactación del suelo, volumen de aire insuficiente, falta de nutrientes y agua. La mejor capa de suelo para el muestreo del suelo es de 5 a 25 cm. Generalmente, el contenido bacteriano por gramo de suelo es de cientos de miles a miles de millones, y casi todos los tipos. de bacterias y actinomicetos se pueden aislar si es necesario Bacillus, Pseudomonas, Brevibacterium, Escherichia coli, algunas bacterias que se relamen los labios, etc.
Pero, en general, las levaduras se distribuyen en la capa más superficial del suelo, de unos 5 a 10 centímetros, y los mohos y las bacterias aeróbicas también se distribuyen en las capas poco profundas del suelo. \@GA;~x.b
2. pH del suelo y condiciones de la vegetación -fT]}T6=
El pH del suelo afecta la distribución de las especies microbianas. Un ambiente de suelo alcalino (pH 7,0-7,5) es adecuado para el crecimiento de bacterias y actinomicetos. Por el contrario, el moho y la levadura prosperan en suelos ácidos (pH de 7,0 o menos). La vegetación también influye en la distribución de los microorganismos porque los exudados de las raíces de las plantas varían. Por ejemplo, los huertos de tomates o los montones de tomates podridos tienen más bacterias productoras de vitamina C. A medida que las uvas u otros árboles frutales maduran, la cantidad de levadura en el suelo aumenta cerca de las raíces. m：)vgt;vu
3. Geografía bh3}[O, L A
La cantidad y los tipos de microorganismos en el suelo del sur son mayores que los del suelo del norte, especialmente en los tropicales y suelos subtropicales. Muchas cepas microbianas industriales, como las bacterias productoras de antibióticos, especialmente mohos y levaduras, provienen principalmente de suelos del sur. La razón es que el sur tiene altas temperaturas, largas estaciones cálidas, fuertes lluvias, alta humedad relativa, muchas especies de plantas, una alta cobertura vegetal y un suelo rico en materia orgánica, lo que forma un entorno de crecimiento microbiano único. 0; 6.PK
IV. Condiciones estacionales 75jq O_:
El número de microorganismos cambia significativamente en las diferentes estaciones. En invierno, la temperatura es baja, el clima es seco. El crecimiento de los microorganismos es lento y el número es el más pequeño. A medida que aumenta la temperatura en primavera, los microorganismos crecen vigorosamente y su número aumenta gradualmente. Pero en el sur, a menudo hay lluvias continuas en primavera, un alto contenido de humedad del suelo y una mala ventilación. Incluso si existe la temperatura y la humedad que necesitan los microorganismos, no favorecen su crecimiento y reproducción. Luego, del verano al otoño, durante unos 7 a 10 meses, las temperaturas son más altas, la vegetación es rica y el número de microorganismos en el suelo es mayor que en cualquier otra época. Por lo tanto, lo ideal es tomar muestras del suelo en otoño. /3L1Un*
(2) Método de muestreo zVd2kuIamp;?
Utilice una pala de muestreo para eliminar unos 5 cm de suelo flotante en la superficie, tome de 10 a 25 muestras de suelo de 5 a 25. lugares y empaquételo. Póngalo en la bolsa de plástico preparada de antemano y átela bien. Cuando el suelo del norte está seco, se pueden tomar muestras en entre 10 y 30 lugares. Numere las bolsas de plástico y registre la ubicación, la textura del suelo, el nombre de la vegetación, la época y otras condiciones ambientales. En general, las muestras deben separarse inmediatamente después de su extracción para evitar la muerte de los microorganismos. Pero a veces hay muchas muestras, o el viaje al medio silvestre para tomar la muestra es largo y es difícil separarlas a tiempo. En este caso, puedes preparar con antelación pendientes de tubos de ensayo con medios de cultivo selectivos y llevarlos contigo. Vaya a un lugar y mezcle bien las muestras de suelo tomadas, luego tome de 3 a 4 y espolvoréelas en la pendiente del tubo de ensayo. Esto puede evitar la muerte de las cepas por no separarse a tiempo.
II.Muestreo según las características fisiológicas de los microorganismos wbyY?tH
1. Según el tipo nutricional del microorganismo r=uS. hrF
Cada microorganismo tiene diferentes requerimientos de fuentes de carbono y nitrógeno, y la distribución también es diferente. Las investigaciones muestran que las necesidades nutricionales y los tipos metabólicos de los microorganismos están altamente relacionados con su entorno de crecimiento. Por ejemplo, hay bastante basura y madera podrida en el suelo del bosque, que es rico en celulosa y adecuado para el crecimiento de bacterias productoras de celulasa que utilizan la celulosa como fuente de carbono cerca de las plantas procesadoras de carne y en el drenaje de los restaurantes; zanjas, dado que el lodo contiene una gran cantidad de carroña, frijoles y grasa, las bacterias que producen proteasa y lipasa se pueden aislar mediante muestreo aquí en molinos harineros, fábricas de dulces, destilerías, plantas procesadoras de almidón, etc., es fácil de separar en estos lugares Cepas que producen proteasas y carbohidrasas. Para detectar levaduras a base de azúcar, a menudo se toman muestras de miel, conservas, frutas dulces y jugos de plantas con un alto contenido de azúcar. Al detectar bacterias productoras de pectinasa, dado que las frutas y verduras como los cítricos, las fresas y el ñame contienen grandes cantidades de pectina, es mejor tomar muestras de las partes podridas de las muestras anteriores y del suelo del huerto. Si necesita detectar microorganismos que metabolizan y sintetizan ciertos compuestos, es fácil obtener resultados satisfactorios recolectando muestras de las cercanías de las fábricas donde se utilizan, producen o procesan grandes cantidades de dichos compuestos. Las cepas que utilizan hidrocarburos como fuentes de carbono pueden detectarse fácilmente en suelos cercanos a campos petrolíferos.
Hartman et al. aislaron una cepa de micobacteria que utiliza dicloroetano como fuente de carbono y energía cerca de una planta de dicloroetano. Además, se seleccionaron tres cepas de bacterias degradantes del petróleo a partir de lodos aceitosos, a saber, Zoogloea sp., Azomonas sp. y Pseudomonas sp., que pudieron utilizar aceite lubricante mecánico de 20# como única fuente de carbono. Por supuesto, una sustancia que se va a degradar también puede enriquecerse como única fuente de carbono o nitrógeno para los microorganismos de la muestra y luego separarse y tamizarse. X2}\i5{
Además, muchos microorganismos no son completamente específicos en el uso de fuentes de carbono. Por ejemplo, algunas bacterias productoras de lipasa que utilizan aceite como fuente de carbono también pueden descomponer el almidón u otros azúcares. Sustancias para obtener energía para crecer. Los microorganismos de los yacimientos petrolíferos que utilizan petróleo y otros hidrocarburos como fuentes de carbono también pueden utilizar ciertos azúcares como fuentes de carbono. También se han encontrado microorganismos con estas características en suelo, agua y otras muestras. Pero la cantidad es pequeña. \ ExM.T
2. Basado en las características fisiológicas de los microorganismos w-C ~ Ik
Al examinar algunos microorganismos con propiedades especiales, es necesario tomar muestras de ubicaciones apropiadas según las características únicas Características fisiológicas de los microorganismos. Por ejemplo, para detectar bacterias productoras de enzimas de alta temperatura, generalmente es necesario ir al sur, donde la temperatura es más alta, o recolectar muestras de aguas termales, erupciones volcánicas y sitios de abono en el norte para aislar las bacterias de baja temperatura; bacterias productoras de enzimas, puede ir a lugares fríos, como las regiones árticas y antárticas, sótanos de hielo y muestreo de aguas profundas. El aislamiento de bacterias tolerantes a la presión generalmente requiere muestreo del fondo marino; Debido a que los microorganismos que viven en las profundidades del mar pueden soportar una alta presión hidrostática, por ejemplo, una cepa de Micrococcus que vive en el agua (Micrococcus aquivivus) extraída del mar puede crecer bajo una presión de 600 atmósferas. Para aislar levaduras altamente tolerantes a la osmótica, que generalmente están menos distribuidas en el suelo porque prefieren un ambiente ácido y azucarado, las muestras generalmente se toman de frutas dulces, conservas o depósitos de bagazo. Por ejemplo, se aisló una cepa de levadura hiperosmótica del néctar de flores que podía tolerar niveles elevados de azúcar de 30 . AE={P*g
3. Muestreo ambiental especial @{IWS@.
1. La influencia de las condiciones ambientales localesjr bEJ.
Cabe señalar que además de verse afectada por factores integrales como sus propias características fisiológicas y condiciones ambientales, la distribución de los microorganismos también se ve afectada por las condiciones ambientales locales. Por ejemplo, el clima del norte es frío, la temperatura media anual es baja y hay relativamente pocos microorganismos a altas temperaturas. Sin embargo, existe una gran cantidad de microorganismos de alta temperatura en las aguas termales o compost de la zona. La capa de suelo rica en oxígeno sólo es razonablemente adecuada para el crecimiento de bacterias aeróbicas. De hecho, algunas bacterias gastrointestinales sospechosas sobreviven porque el crecimiento y la reproducción de bacterias aeróbicas requieren una gran cantidad de oxígeno en la capa del suelo, lo que crea un entorno favorable para ellas. el crecimiento local de bacterias gastrointestinales sospechosas, por lo que generalmente las bacterias gastrointestinales sospechosas también se pueden aislar del suelo. X/ gIH/
El océano es un entorno local especial para el crecimiento de microorganismos. Aunque muchos microorganismos también crecen a través de ríos, aguas residuales, agua de lluvia o polvo, debido a las condiciones únicas de alta sal, alta presión, baja temperatura y luz en el océano, por lo que los microorganismos marinos tienen actividades fisiológicas especiales y, en consecuencia, producen muchos productos especiales que son diferentes de las fuentes terrestres. Académicos de la antigua Unión Soviética descubrieron que entre el 20 y el 50% de los microorganismos de las ascidias y los pepinos de mar pueden producir compuestos con toxicidad bacteriana y actividad bactericida. Además, la Universidad de Maryland en Estados Unidos también ha aislado bacterias o bacterias que habitan en bacterias de esponjas para combatir la leucemia y el cáncer de nasofaringe con sustancias anticancerígenas. Japón descubrió que más de 80 cepas de arqueas amantes del estrés en los intestinos de peces de aguas profundas pueden producir EPA y DHA, siendo los rendimientos más altos 36 y 24 respectivamente. Los autores aislaron una cepa de pj20 del intestino de bacalao, que produjo 14,78 mg/L de EPA, lo que representó el 12,7 de los ácidos grasos cuando se cultivó a 15°C. Además, se analizó una cepa que producía hasta 290 mg/l de ADN a partir de atún marino japonés. Al tomar muestras en el océano, se pueden hacer referencia a los patrones de distribución de diferentes tipos de microorganismos: la capa superficial está formada principalmente por bacterias heterótrofas aeróbicas, la capa inferior es rica en materia orgánica y tiene un alto contenido de sulfuro de hidrógeno, y hay más bacterias anaeróbicas de descomposición. y bacterias reductoras de sulfato. Hay más bacterias de azufre de color púrpura en la capa.
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Los microorganismos con propiedades especiales suelen distribuirse en algunos ambientes especiales. Por ejemplo, una cueva en el centro-sur de Texas en los Estados Unidos contiene una gran cantidad de microorganismos alcalinos, oxidantes de amoníaco y productores de quitinasa porque aquí viven 200.000 murciélagos y comen y se alimentan de 50.000 libras de comida cada noche (libras). Los insectos, sus excrementos crean una rica capa de nutrientes a 0 m de profundidad en la cueva. Este ambiente especial juega un papel en la selección y el enriquecimiento de este microorganismo. Además, se han aislado microorganismos que fijan nitrógeno y degradan la celulosa de las tripas de los gusanos que infestan los barcos de madera. También se han aislado bacterias que producen enzimas que degradan los terpenos en los intestinos de los osos koala. Esto puede deberse a que los osos koala se especializan en comer plantas de eucalipto con alto contenido de terpenos, lo que crea un ambiente adecuado para el crecimiento de microorganismos. Se aisló una cepa de Arthrobacter de cáscaras de maní tratadas con ácido nítrico en los Estados Unidos. Esta bacteria utiliza la lignina como única fuente de carbono. Su digestibilidad de las cáscaras de maní tratadas puede alcanzar 63. Agregue levadura de cerveza para aumentar su contenido de proteína. Ser utilizado como aditivo alimentario para ganado vacuno, porcino y pollos. |NJe4lw ?
2. Impacto de condiciones ambientales extremas MqGF~h|
Los microorganismos generalmente crecen en condiciones de temperatura media y pH neutro. Sin embargo, en entornos de alta temperatura, baja temperatura, alta acidez, alto contenido de álcali, alta intensidad de sal o alta intensidad de radiación donde la mayoría de los microorganismos no pueden crecer, también existe una pequeña cantidad de microorganismos que se denominan extremófilos. El entorno de vida especial les hace tener características genéticas, estructuras especiales y funciones fisiológicas que son diferentes de los microorganismos comunes. Por lo tanto, tienen un valor de aplicación importante en la metalurgia, la minería y la producción de preparaciones enzimáticas especiales. Z.am^Q^Y!
La temperatura óptima de crecimiento de las bacterias termófilas es de 15°C. También pueden crecer y reproducirse a 0°C, y la temperatura máxima no supera los 20°C. Distribuido principalmente en ambientes de baja temperatura como las regiones árticas y antárticas, cuevas de hielo, montañas, mares profundos y suelo. Este tipo de microorganismos puede producir muchos alimentos aromatizados mediante fermentación a baja temperatura, ahorrar energía y reducir la contaminación por bacterias mesófilas. Los microorganismos que crecen de manera óptima por encima de un pH de 8,0 (generalmente entre pH 9 y 10) se denominan alcalófilos. Se ha aislado una gran cantidad de diferentes tipos de bacterias alcalófilas del suelo, lagos alcalinos, manantiales alcalinos e incluso del océano. Dado que la mayoría de los lagos alcalinos son hipersalinos, muchos organismos alcalofílicos también son halófilos. Las enzimas producidas por estas bacterias, como las proteasas resistentes a los álcalis y las celulasas alcalinas, se utilizan como ingredientes para lamer en detergentes, y la amilasa alcalina también se utiliza en la industria textil. Los genes de bacterias alcalófilas también se pueden utilizar para regular la expresión y secreción de productos genéticos en otras bacterias. Los microorganismos termófilos son la mejor fuente de bacterias termófilas. Se han aislado termófilos extremos en fuentes termales y cráteres submarinos. Un microorganismo primitivo aislado de un cráter volcánico en Italia que arrojó gas azufre crece mejor a un pH de 2 y una temperatura de 90 grados centígrados. Su tipo metabólico es extremadamente especial. Es una bacteria autótrofa que oxida el azufre en sulfúrico. ácido para promover su propia proliferación. También es una bacteria anaeróbica que utiliza hidrógeno para reducir el azufre y producir H2S. l=8)_z;~D
Sección 2 Cultivo de enriquecimiento de muestras que contienen microorganismos$#2ik ~]gt
El cultivo de enriquecimiento es cuando el contenido de microorganismos objetivo es pequeño. Según este método , los medios de cultivo selectivos están diseñados de acuerdo con las características fisiológicas de los microorganismos para crear condiciones de crecimiento favorables, de modo que los microorganismos objetivo puedan crecer y reproducirse rápidamente en el mejor ambiente, y su número aumentará, pasando de especies inferiores en condiciones naturales a especies dominantes. bajo ambientes artificiales para facilitar el aislamiento de las cepas requeridas. v_)a=Ioamp; 2
El cultivo de enriquecimiento se controla principalmente en función de factores fisiológicos como el carbono, la fuente de nitrógeno, el valor del pH, la temperatura y la demanda de oxígeno de los microorganismos. El enriquecimiento generalmente se puede llevar a cabo desde los siguientes aspectos. ; ZHKTOoK
1. Controlar el contenido nutricional del medio de cultivo) 67_yHW
Los microorganismos tienen tipos metabólicos muy ricos y su distribución cambia con las diferentes condiciones ambientales. Si hay más cantidad de una determinada sustancia en el medio ambiente, habrá más microorganismos que puedan descomponerla y utilizarla.
Por tanto, antes de aislar dichas cepas, se puede añadir artificialmente la matriz correspondiente al medio de proliferación como única fuente de carbono o nitrógeno. Las bacterias que pueden descomponer y utilizar la sustancia se multiplican rápidamente gracias a una nutrición suficiente, mientras que otros microorganismos no pueden descomponer la sustancia y se inhibe su crecimiento. Por supuesto, los microorganismos que pueden crecer en este medio no son una sola cepa, sino un grupo de microorganismos con el mismo tipo nutricional. La selectividad de los medios de enriquecimiento es sólo relativa, es sólo un paso en el aislamiento de microorganismos. sDT(3{)L7
Hay dos ejemplos. Por ejemplo, si se aíslan bacterias que producen hidrolasa, se puede utilizar el sustrato correspondiente como única fuente de carbono en el medio de enriquecimiento y se pueden extraer muestras bacterianas. Los microorganismos objetivo se cultivan utilizando condiciones de cultivo óptimas (pH, temperatura, nutrientes, condiciones de aireación, etc.). Las bacterias que pueden descomponer y utilizar el sustrato pueden multiplicarse en grandes cantidades, mientras que otros microorganismos no podrán crecer debido a la falta de fuentes de carbono y la cantidad de bacterias disminuirá gradualmente. En este punto, el aislamiento producirá el microorganismo deseado. Otro ejemplo es el aislamiento de levaduras hipertónicas. Dado que este tipo de bacterias son menos abundantes en muestras generales, el medio de enriquecimiento y las condiciones de cultivo deben diseñarse estrictamente. Primero, pruebe el néctar que tiene un alto contenido de azúcar y un buen contenido de azúcar. El medio de enriquecimiento es jugo de néctar de 5 a 6, glucosa de 30 a 40, valor de pH de 3 a 4 y temperatura de cultivo de 20 a 25°C, de modo que se pueda lograr el propósito del enriquecimiento. , mEFp_a
En el cultivo de enriquecimiento se debe seleccionar el medio de enriquecimiento apropiado según los diferentes tipos de microorganismos. Por ejemplo, la proliferación de hongos filamentosos suele utilizar medio agar almidón, y su fórmula es (): Almidón soluble 4. , extracto de levadura 0,5, agar 2, pH 6,5~7,0. Preste especial atención a la cantidad de extracto de levadura agregado durante el proceso de preparación. Demasiado extracto de levadura estimulará el crecimiento del micelio, pero no favorece la producción de esporas. Y: [WwX|
Según la plasticidad del rango de tolerancia de los microorganismos a los factores ambientales, las bacterias ambientales que degradan altas concentraciones de contaminantes se pueden aislar mediante un cultivo de enriquecimiento continuo. Por ejemplo, la anilina se utiliza como única fuente de carbono para el cultivo de enriquecimiento de la muestra. Después de que el sustrato se degrada por completo, una cierta cantidad del inóculo se transfiere a una solución de cultivo de enriquecimiento nueva que contiene anilina y el cultivo de transferencia se continúa varias veces. Al mismo tiempo, al aumentar gradualmente la concentración de anilina, se puede obtener la solución de cultivo de la cepa que degrada la anilina. Esta cepa es dominante en la degradación de la anilina y se puede separar aún más mediante el método de recubrimiento por dilución o el método de rayado en placa para obtener microorganismos que. Puede degradar la anilina en alta concentración. El tiempo de transferencia se puede determinar en función de la degradación del sustrato o del crecimiento de microorganismos. Por ejemplo, al aislar bacterias que degradan el ciclohexano, después de que la muestra se enriquece en un medio de cultivo con ciclohexano como única fuente de carbono, el líquido de cultivo cambia de incoloro a turbio y de color blanco lechoso. Al mismo tiempo, se puede observar crecimiento microbiano en las paredes del matraz Erlenmeyer. En este momento, se pueden transferir 2 del inóculo a un medio de enriquecimiento nuevo para continuar con el cultivo. El método de cultivo de enriquecimiento continuo lleva mucho tiempo, a veces incluso de 6 a 7 meses, pero el efecto es mejor. Este método también se ha utilizado para separar las bacterias en descomposición de algunos contaminantes como el DDT y el metil paratión (MP), y también ha logrado resultados satisfactorios. W6ZXb_X
2. Control de las condiciones de cultivo OSk: njyC[
Al cribar ciertos microorganismos, además de seleccionar nutrientes a través del medio de cultivo, también necesitan utilizar sus efectos sobre el pH, Se requieren temperaturas y requisitos especiales de ventilación y otras condiciones para controlar el cultivo y lograr una separación efectiva. Por ejemplo, el crecimiento y reproducción de bacterias y actinomicetos generalmente requieren alcalinidad (7,0-7,5), mientras que los mohos y las levaduras requieren acidez (4,5-6). Por tanto, ajustar el valor del pH del medio de enriquecimiento al rango requerido para el aislamiento de los microorganismos no sólo facilita su propio crecimiento, sino que también excluye algunas bacterias no deseadas. P1; T-. Se aumenta el número de nematodos para lograr el propósito de enriquecimiento. cPNZ-
Al seleccionar extremófilos, se deben diseñar condiciones de cultivo apropiadas en función de sus características fisiológicas especiales para lograr el enriquecimiento.
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Los microorganismos generalmente examinados suelen ser bacterias aeróbicas, pero a veces es necesario aislar las bacterias anaeróbicas. Porque las bacterias estrictamente anaeróbicas no solo pueden eliminar la necesidad de dispositivos de aireación y agitación, sino que también ahorran energía En este momento, además de configurar un medio de cultivo especial, también es necesario preparar un dispositivo de cultivo especial para crear un ambiente favorable para el crecimiento de bacterias anaeróbicas para aumentar su número y facilitar su aislamiento. /p>
3. , Inhibe bacterias inútiles vA@Kb3,
En el proceso de aislamiento y cribado, además de controlar las condiciones de nutrición y cultivo y aumentar el número de microorganismos beneficiosos para el aislamiento. y enriquecimiento, alta temperatura, alta presión, adición de antibióticos, etc. El método reduce la cantidad de microorganismos no objetivo y aumenta la proporción de microorganismos objetivo, lo que también puede lograr el propósito del enriquecimiento.
Bacillus es. aislado del suelo Debido a que Bacillus tiene las características de resistencia a altas temperaturas, es difícil matarlo a 100 °C y no morirá por completo hasta los 121 °C. Primero puede calentar la muestra de suelo a 80 °C o remojarla en 50. % de solución de etanol durante 1 hora para matar las cepas que no producen esporas y luego agregar una cantidad adecuada al medio de enriquecimiento. Las sales biliares y el lauril sulfato de sodio pueden inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas, pero no tienen ningún efecto inhibidor sobre las Gram negativas. bacterias Al aislar bacterias anaeróbicas, se puede agregar una pequeña cantidad de tioglicolato de sodio como agente reductor. Reduce el potencial redox del medio de cultivo y crea un ambiente anóxico, que favorece el crecimiento y la reproducción de bacterias anaeróbicas. detección de moho, se pueden agregar antibióticos como la tetraciclina al medio de cultivo para inhibir las bacterias para reducir la proporción de moho en la muestra y aislar fácilmente la cepa deseada al aislar actinomicetos, puede agregar 10 gotas de fenol a la suspensión de la muestra; agregue penicilina (inhibe las bacterias G) o estreptomicina (inhibe las bacterias G) 30 ~ 50 U/ml y 10 μg/ml de propionato de sodio (inhibe las bacterias G) y 10 μg/ml (inhibe el moho) para inhibir el crecimiento de moho y bacterias. Además, se informa que el dicromato de potasio es eficaz contra hongos y bacterias del suelo. El efecto inhibidor obvio también se puede utilizar para aislar selectivamente actinomicetos distintos de Streptomyces. Primero, seque la muestra de suelo al aire, luego caliéntela a 100 °C y. manténgalo durante 1 hora, lo que puede reducir las bacterias y la cantidad de Streptomyces. Al aislar levaduras resistentes al alcohol de alta concentración y levaduras hipertónicas, las muestras se pueden tratar en alcohol de alta concentración y soluciones de sacarosa de alta concentración durante un período de tiempo. para matar los microorganismos no objetivo antes de la separación LO] D Si hay una cantidad suficiente de microorganismos objetivo, no es necesario realizar un cultivo de enriquecimiento, simplemente sepárelos y purifíquelos directamente 3{RuR yi
Sección. 3 Aislamiento de microorganismos}uo5rB5D
La muestra se enriquece después del cultivo, los microorganismos objetivo han proliferado principalmente y el número de otros tipos de microorganismos se ha reducido relativamente, pero no han muerto. Todavía hay una variedad de microorganismos mezclados en la solución de cultivo enriquecida, e incluso el microorganismo dominante no es puro. Por ejemplo, entre el mismo grupo de bacterias productoras de lipasa que utilizan el petróleo como fuente de carbono, algunas son bacterias, otras son mohos, algunas son bacilos, algunas no producen esporas, algunas tienen una gran capacidad de producción, otras tienen una capacidad de producción débil. etc. Por lo tanto, después del cultivo de enriquecimiento, la muestra debe separarse y purificarse aún más para aislar directamente las cepas más necesarias de la muestra. Mm`jk：]