Biotecnología enzimática de Shanghai

Pasos operativos

1. Dilución del estándar: Este kit proporciona un doble estándar original. El usuario puede diluirlo en un pequeño tubo de ensayo de acuerdo con la siguiente tabla.

160 U/L de estándar No. 5, agregar 150 μl de estándar original a 150 μl de diluyente estándar.

80 U/L de estándar No. 4, agregar 150 μl de estándar No. Estándar 5 a 150 μl de Diluyente Estándar estándar

40 U/L Estándar No. 3 Agregar 150 μl de Estándar No. 4 a 150 μl de Diluyente Estándar

20 U/L No 2 Estándar 150 μl de Estándar No. 3 Agregue 150 μl de diluyente estándar a la muestra.

10 U/L de Estándar No. 1 Agregue 150 μl de estándar No. 2 a 150 μl de diluyente estándar. .

2. Agregue muestras: configure los orificios en blanco respectivamente (no se agrega ninguna muestra ni reactivo marcado con enzima al pocillo de control en blanco y los pasos restantes son los mismos), los pocillos estándar y los pocillos de muestra. para ser probado. Agregue con precisión 50 μl del estándar en la placa recubierta con enzima marcada, primero agregue 40 μl de diluyente de muestra al pocillo de la muestra a analizar y luego agregue 10 μl de la muestra a analizar (la dilución final de la muestra es 5 veces). Agregue la muestra al fondo del pocillo de la placa de enzimas, trate de no tocar la pared del pocillo y agite suavemente para mezclar.

3. Incubación: Sellar la placa con film sellador e incubar a 37°C durante 30 minutos.

4. Preparación de la solución: diluya la solución de lavado concentrada 30 veces con agua destilada y reserve.

5. y séquelo con centrifugado. Llene cada pocillo con solución de lavado, déjelo reposar durante 30 segundos y luego deséchelo. Repita esto 5 veces y séquelo.

6. Añadir enzima: Añadir 50 μl de reactivo de marcado enzimático a cada pocillo, excepto a los pocillos en blanco.

7. Incubación: La operación es la misma que la 3.

8. Lavado: El funcionamiento es el mismo que el paso 5.

9. Desarrollo del color: primero agregue 50 μl de cromógeno A a cada pocillo, luego agregue 50 μl de cromógeno B, agite suavemente para mezclar y desarrolle el color durante 15 minutos a 37 °C en la oscuridad. p>

10. Terminación: Agregue 50 μl de solución de parada a cada pocillo para finalizar la reacción (el azul se vuelve amarillo inmediatamente).

11. Medición: Mida la absorbancia (valor OD) de cada pocillo secuencialmente con un aire acondicionado cero y una longitud de onda de 450 nm. La medición debe realizarse dentro de los 15 minutos posteriores a la adición de la solución de parada.

Resumen de los procedimientos operativos:

Cálculo

Tomando la concentración de la sustancia estándar como abscisa y el valor de OD como ordenada, dibuje una curva estándar en el papel cuadriculado. Encuentre la concentración correspondiente de la curva estándar de acuerdo con el valor de OD de la muestra; luego multiplíquelo por el factor de dilución o use la concentración y el valor de OD del estándar para calcular la ecuación de regresión lineal de la curva estándar; sustituya el valor de DO de la muestra en la ecuación para calcular la concentración de la muestra y luego, multiplicado por el factor de dilución, obtendrá la concentración real de la muestra.

Notas

1. El kit debe sacarse del ambiente refrigerado y dejarse equilibrar a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos antes de su uso. Si la placa recubierta con la etiqueta enzimática no se agota después de abrirla, las tiras deben almacenarse en una bolsa sellada.

2. El líquido de lavado concentrado puede tener cristales precipitados. Al diluirlo, se puede calentar en un baño de agua para ayudar a que se disuelva. El resultado no se verá afectado durante el lavado.

3． Se debe utilizar un inyector de muestra para cada paso de la adición de muestra y se debe verificar su precisión con frecuencia para evitar errores experimentales. Es mejor controlar el tiempo de muestreo dentro de los 5 minutos a la vez. Si hay una gran cantidad de muestras, se recomienda utilizar una pistola de volea para agregar muestras.

4． Haga una curva estándar al mismo tiempo cada vez que mida. Lo mejor es hacer agujeros duplicados. Si el contenido de la sustancia que se va a medir en la muestra es demasiado alto (el valor de DO de la muestra es mayor que el valor de DO del primer pocillo del pocillo estándar), dilúyalo un cierto múltiplo (n veces) con el Diluyente de muestra antes de medir. Al calcular, multiplique la dilución total al final.

5. La película selladora es para un solo uso para evitar la contaminación cruzada.

6. Guarde el sustrato lejos de la luz.

7. Siga estrictamente las instrucciones y los resultados de la prueba deben determinarse en función de las lecturas del lector de microplacas.

8. Todas las muestras, soluciones de lavado y diversos desechos deben tratarse como agentes infecciosos.

9． No se deben mezclar componentes de diferentes números de lote de este reactivo.

10. Si hay alguna discrepancia con el manual en inglés, prevalecerá el manual en inglés.

Condiciones de conservación y periodo de validez

1. Almacenamiento del kit: 2-8 ℃.