¿Qué tal el kit de extracción de ARN de la planta de llenado en blanco Qiagen de Beijing Aidele Company?
Ahora proporciono información para su referencia, espero que pueda ayudarlo;
Kit de extracción de ARN vegetal que llena el vacío de Qiagen
Compañía general polisacárido Razones y soluciones para el fallo del kit de extracción de ARN de plantas con polifenoles
Muchas muestras de ARN de plantas contienen una gran cantidad de polisacáridos, polifenoles, metabolitos y pigmentos. Muchas muestras de ARN de plantas contienen una gran cantidad de polisacáridos. Los polifenoles, metabolitos, pigmentos y otros componentes provocan oxidación, pardeamiento, degradación y otros fenómenos durante el proceso de extracción de ARN. Además, debido a la diversidad de especies de plantas, la situación es más complicada. El método CTAB manual no se analiza debido a su largo tiempo y su operación engorrosa. Actualmente no existen buenos kits, incluidos kits importados como Qiagen y Promega, que no pueden cumplir con los requisitos de los investigadores para la extracción de ARN vegetal.
Analicemos las razones por las que no se puede extraer con éxito el ARN vegetal:
Existen dos kits de extracción de ARN más comunes en el mercado: el primero es el método mejorado TRIzol (clase mejorada de TRIzol métodos); el segundo es la clase de métodos mejorada de TRIzol: método de clase mejorada de TRIzol (incluido el método de solución y el método de columna de centrifugación), el segundo: lisis directa a través del método de columna (método de columna de centrifugación)
Razones por el fracaso del primer kit 1 El método más popular en el mercado de ARN es TRIzol, o el método modificado con TRIzol, o el método modificado con columna de centrifugación TRIzol plus. TRIzol, también conocido como el principio de un solo paso de isotiocianato de guanidinio/fenol/cloroformo, es más adecuado para la extracción de tejidos y células de origen animal. Para materiales vegetales comunes con bajo contenido de polisacáridos y polifenoles, los productos del principio TRIzol también pueden ser. extraído. Sin embargo, cuando los polisacáridos, polifenoles y metabolitos secundarios son abundantes, el método TRIzol no puede evitar la interferencia de los polisacáridos y polifenoles en la fase de ARN/ADN, dejando una gran cantidad de ADN o una gran cantidad de polisacáridos, polifenoles o productos del metabolismo secundario. dañan oxidativamente el ARN o dejan polisacáridos, polifenoles o metabolitos de pigmentos que inhiben reacciones posteriores como la transcripción inversa. Debido a limitaciones técnicas, la mayoría de los fabricantes nacionales actualmente en el mercado utilizan el método de mejora de TRIzol, independientemente de si se agrega una columna de centrifugado. Sin embargo, la práctica ha demostrado que esta mejora no puede resolver fundamentalmente el problema. En realidad, es muy sencillo juzgar si el kit adopta este método mejorado: si la solución de lisis contiene olor a fenol y si se usa cloroformo. Si se usa cloroformo, es una mejora con respecto al método TRIzol.
La segunda razón del fracaso del kit: el método de lisis directa entre columnas es actualmente el método más avanzado, pero también es el más técnico. Este método utiliza una solución de lisis (sin fenol ni cloroformo) para escindir directamente el ARN/ADN a través de la columna al mismo tiempo, y luego directamente en la columna para separar el ARN/ADN. Por lo tanto, las ventajas de este método son, en primer lugar, que evita. el uso de polisacáridos y triazoles. La desventaja de los polifenoles es que no pueden separar con éxito el ARN/ADN. La segunda es que no se utiliza fenol cloroformo, que es tóxico. Sin embargo, precisamente por su avanzada tecnología y gran dificultad, los fabricantes nacionales, incluidas las empresas importadoras, tienen dos dificultades técnicas que no han superado. Primero, se deben formular los componentes de la solución de lisis y se deben agregar polifenoles polisacáridos y componentes de metabolitos para eliminar polisacáridos y polifenoles. De lo contrario, se encontrará con el problema de que los polisacáridos y polifenoles interfieran con la extracción. En segundo lugar, a diferencia del principio TRIzol, el ADN/ARN se añade a la columna de adsorción directamente mediante el método de la columna al mismo tiempo. Cómo eliminar el ADN es la primera dificultad, de lo contrario quedará una gran cantidad de ADN. Las empresas nacionales no superaron estas dos dificultades técnicas y el segundo kit falló. La primera dificultad que las empresas extranjeras no han comprendido es que los polisacáridos y polifenoles no se eliminan de la solución de lisis, por lo que el mini kit de plantas RNeasy de Qiagen a menudo no puede extraer con éxito muestras de ARN de plantas más complejas, como muestras de grosella negra, acebo y otras plantas.
Después de tres años de I+D y mejora continua, los investigadores de Beijing Adelaide Biotech desarrollaron el RN09 EASYspin líder mundial basándose en las características de los polisacáridos y polifenoles vegetales, así como en las razones del fracaso de los dos kits. Kit de extracción rápida de ARN vegetal, uno: adopta el método de columna directa, abandonando por completo los principios de los métodos de TRIzol fenol y cloroformo, utilizando materias primas no tóxicas y agregando derechos de propiedad intelectual independientes. En primer lugar, utiliza el método de columna directa, abandonando por completo los principios de los métodos de TRIzol fenol y cloroformo, utilizando materias primas no tóxicas y agregando polisacáridos y polifenoles con derechos de propiedad intelectual independientes para eliminar componentes, resolviendo el problema de los polisacáridos, polifenoles. y metabolitos. Interrupción e interferencia del aislamiento de ARN. En segundo lugar, supera las dificultades técnicas del método de columna directa para eliminar el ADN y resuelve el problema del exceso de residuos de ADN.