Acerca de la extracción de ARN del plasma

1. Traiga el suyo: etanol absoluto, tubo de centrífuga de 1,5 ml sin ARNasa.

2. Saque el líquido de lavado, los pasos son los siguientes:

a) Líquido de lavado A: agregue 9 ml de etanol absoluto a 21 ml; agregue 18 ml de etanol absoluto a 42 ml.

b) Solución de lavado B: agregar 21 ml de etanol absoluto a 9 ml; agregar 42 ml de etanol absoluto a 18 ml;

c) Si hay precipitación en la solución de lavado preparada, se puede disolver a 37°C, agitar bien antes de usar.

3. Tome un tubo de centrífuga de 1,5 ml sin agregar RNasa, agregue 200 μL de muestra, 4 μL de portador de ARN y mezcle bien, luego agregue 300 μL de solución de lisis y 20 μL de solución de digestión, agite durante 10 segundos, mezcle y luego agua. baño a 56°C durante 10 minutos hasta su completa lisis.

4. Añadir 1000μL de etanol absoluto, invertir suavemente y mezclar si queda una suspensión translúcida, no afectará a la extracción de ARN ni a los experimentos posteriores.

5. Coloque la columna de adsorción en el tubo de recolección, pipetee 760 μL de la solución anterior en la columna de adsorción, déjela reposar durante 2 minutos, centrifugue a 12000 rpm?4°C durante 1 minuto y deséchela. el líquido residual en el tubo de recogida.

6. Transfiera los 760 μL restantes de la solución a la columna de adsorción y repita el paso 5.

7. Coloque la columna de adsorción nuevamente en el tubo de recolección. ¿Volver a colocar la columna cromatográfica en el tubo de recolección, agregar 500 μL de solución de lavado A a la columna y ejecutar a 12,000 rpm?

8. ¿A a la columna B, a 12.000 rpm?

9. ¿Volver a colocar la columna en el tubo de recolección, a 12.000 rpm?

10. -libre Agregue 30-50 μL de eluyente a un tubo de centrífuga de 1,5 mL, déjelo reposar durante 3 minutos, guárdelo a 12.000 rpm.

11,-70 °C o utilícelo directamente para el siguiente experimento.

Notas

Para prevenir la contaminación por RNasa, es mejor usar guantes y máscaras limpias desechables durante el experimento, y utilizar recipientes tratados sin RNasa y tubos ultrasónicos sin RNasa. .

El líquido de lavado contiene productos químicos agresivos.