Principios y pasos del experimento scratch
El rascado celular es un método común en el laboratorio para analizar la capacidad de migración celular, que simula en cierta medida el proceso de migración celular en el cuerpo. Principio del experimento de raspado: se crea artificialmente un área en blanco en una monocapa de células cultivadas en una placa de cultivo celular o en una placa de micropocillos, lo que se denomina "rasguño". Las células en el borde del raspado migrarán al área en blanco, lo que permitirá que el "rasguño". rascarse" para sanar. . Utilice tecnología de imágenes microscópicas para observar y calcular los cambios en el área del área en blanco para calcular la eficiencia de migración de las células en diferentes condiciones de tratamiento. Por supuesto, la eficiencia de la migración también se puede calcular calculando el cambio en el área de las células que cubren el fondo de la placa.
Por lo general, los rayones se pueden hacer manualmente usando un cabezal con punta, o se pueden usar algunos consumibles comerciales, como insertos de cultivo, para hacer rayones de un ancho determinado. Si el rendimiento experimental es alto, también se pueden usar microporos completamente automáticos. Se utilizó un instrumento de raspado de células de placa (instrumento de raspado completamente automático Agilent BioTek AutoScratch) para realizar la operación de raspado de la placa de 96 pocillos.
Pasos del experimento de raspado:
1. Prepare la placa del pozo de acuerdo con el rendimiento experimental. Si observa y registra el proceso de raspado manualmente, debe marcar previamente el fondo del experimento. Placa de pocillos si utiliza un rascador automático.
2. Inocular una cantidad adecuada de células según las características de las células y el tamaño de los poros de la microplaca seleccionada. la confluencia celular llega a 100 y la monocapa de células
3 Para hacer rayones, use una punta esterilizada, un palillo, consumibles comerciales o un rascador de células automático para hacer rayones en una sola capa de células, e intente. para garantizar que el ancho del raspado sea uniforme entre los grupos de muestras
4. Una vez completado el raspado, use PBS para eliminar las células no adherentes y reemplace el medio de cultivo. La limpieza de las células se puede realizar de forma manual o manual. con un lavador de placas automatizado En comparación con la limpieza manual, el lavador de placas automatizado puede ser más eficiente y reduce las variables introducidas artificialmente
5. p> En circunstancias normales, el experimento de scratch se puede diseñar durante 24 horas, de 4 a 6 horas. Observe y tome una fotografía una vez y calcule la eficiencia de la migración celular.
Si utiliza un equipo de detección de imágenes de microplacas (Sistema de detección de microplacas multifuncional de imágenes de células Cytation de BioTek) para observación y fotografía, los pasos son los siguientes:
5-1. y concentración de gas para proporcionar un entorno de cultivo celular
5-2 Coloque la microplaca en el instrumento, configure la detección cinética las 24 horas, tome fotografías cada 4 horas y complete automáticamente varias veces para cada punto de muestra. disparo
5-3 Una vez completado el experimento de 24 horas, saque la microplaca y exporte las imágenes y los datos de múltiples puntos temporales de cada muestra a través del software con un solo clic.
>5 -4.Genere videos dinámicos de scratch y calcule la eficiencia de migración celular de cada muestra.
El uso de equipos de detección de imágenes de microplacas puede evitar la transferencia repetida de células entre la incubadora y el microscopio en 24 horas. Al mismo tiempo, las funciones de reconocimiento y cálculo automático del software también ahorran mucho tiempo de análisis manual y. Proporcionar datos experimentales más objetivos, precisos y reales.