Preguntas sobre NanoDrop del espectrofotómetro UV de microvolúmenes
1. Aplicación del producto
ND-2000 es actualmente el espectrofotómetro de microvolumen más utilizado en laboratorios nacionales y extranjeros. Su rendimiento superior y sus resultados precisos se han ganado el corazón de muchos. Buenas críticas de los usuarios.
Este producto se puede utilizar en los siguientes aspectos:
* Detección ultravioleta: detección del valor de absorbancia de muestras bajo longitudes de onda ultravioleta convencionales;
* Detección de ácido nucleico : detectable La concentración de diferentes tipos de ácidos nucleicos como dsDNA, ssDNA, RNA y sus valores de absorbancia a 260 nm y 280 nm;
* Detección de sonda: detecta el valor de absorbancia de sondas marcadas con fluorescencia, que pueden se puede utilizar para extraer muestras de aguja con sondas sin marcar;
* Detección de cultivo celular: detecta el valor de absorbancia del cultivo celular a 600 nm;
* Detección de proteínas: detecta la concentración de proteína purificada ordinaria y la concentración a 280 nm Valor de absorbancia;
* Detección de etiquetado de proteínas: puede detectar muestras de proteínas etiquetadas por BCA, Bradford o Lowry, dibujar automáticamente una curva estándar y calcular la concentración de la proteína a medir.
II. Introducción del producto
El espectrofotómetro de ultra microvolumen NanoDrop 2000 es el último producto de NanoDrop. Utiliza las características de tensión superficial de los líquidos. El volumen de muestra solo requiere 0,5 ~ 2 ul. En la mesa de detección, la trayectoria de luz fija se extrae a través del contacto de los brazos superior e inferior para lograr las ventajas de rapidez, traza, alta concentración y sin necesidad de tubos de cuarzo, tubos capilares y otros consumibles para detectar valores de absorción. . El diseño del producto está patentado y es popular en todo el mundo, y su precisión y conveniencia permiten a los científicos realizar investigaciones de manera más eficiente.
NanoDrop 2000 utiliza una lámpara de flash de xenón de alta energía (lámpara de flash de xenón pulsada) para proporcionar una detección de espectro completo de 190 a 840 nm. No requiere calentamiento y se puede utilizar inmediatamente después de encenderlo. Junto con un detector de matriz CCD de alta sensibilidad, el valor de absorción de detección puede llegar a 300Abs (concentración de ADNds de 2 a 15000 ng/ul). La mayoría de los ácidos nucleicos purificados se pueden detectar sin dilución.
La homogeneidad de la muestra a analizar es el requisito más alto para NanoDrop 2000. Generalmente, las muestras de ácido nucleico y proteínas se pueden homogeneizar mejor con un mezclador de vórtice antes de la detección. Si no hay un mezclador de vórtice disponible, pipetee. Se debe utilizar para aspirar y descargar las muestras. Mezclar bien. Si le preocupa que el ADN genómico pueda romperse debido a la acción anterior, caliéntelo a 55 °C durante aproximadamente un minuto para uniformar la muestra antes de la detección y garantizar que 2 ul sean representativos.
Seleccione diferentes modos de detección durante la detección para obtener los resultados más rápidos:
● Espectro de absorción de ácido nucleico ?C, valores de absorción de 230 nm, 260 nm, 280 nm (convertidos a absorción de trayectoria óptica de 10 mm). valor), relación 260/280, relación 260/230 y concentración de ácido nucleico.
● Valores de absorción UV-Vis ?C y espectros de todas las longitudes de onda entre 190~840 nm (presentados como un valor de absorción de trayectoria óptica de 1 mm).
● ¿Método de cuantificación de proteínas A280? Valor de absorción C de 280 nm (convertido en valor de absorción de trayectoria óptica de 10 mm), relación 260/280 y concentración de proteínas. Solo aplicable a proteínas purificadas, que deben tener un coeficiente de extinción masiva conocido antes del cálculo.
● BCA, Bradford y Lowry ?C proporcionan diferentes resultados de valores de absorción de longitud de onda según diferentes cromógenos, dibujan automáticamente una curva estándar y calculan R cuadrado, la concentración de la proteína a medir.
* El modo de detección de proteínas proporciona actualmente tres reactivos cromogénicos cuantitativos comunes: BCA, Bradford y Lowry. Dado que el reactivo cromogénico se profundizará gradualmente con el tiempo, lea atentamente las instrucciones del reactivo y prepare estándares de diferentes concentraciones antes de su uso. , complete la detección dentro del tiempo óptimo para obtener una buena curva estándar. Cada curva estándar puede tener hasta siete estándares y cada estándar se puede repetir hasta cinco veces.
* Al medir la proteína, el volumen de la muestra debe ser de 2 ul. Después de analizar cada muestra, se debe limpiar con papel de limpieza Kimwipes con bajo contenido de polvo (No. 34155) de 15 a 20 veces para evitar residuos de. agente colorante y proteína.
Rango de concentración:
Tipo de muestra
Concentración mínima
Concentración máxima
(Por favor, diluya la muestra si supera )
Reproducibilidad (más de cinco repeticiones)
Ácido nucleico
2 ng/ul
15000 ng/ul (dsDNA )
p>12000 ng/ul (ARN)
Cuando el rango de concentración es de 2-100 ng/ul, la DE es ± 2 ng/ul
El rango de concentración es superior a 100 ng/ul, el CV es ± 2%
BSA pura
0,10 mg/ml
100 mg/ml
El rango de concentración es 0,05 Cuando la concentración es -10 mg/ml, la SD es ± 0,10 mg/ml
Cuando la concentración es superior a 10 mg/ml, el CV es ± 2 %
Proteína, cuantificada por BCA
0,2 mg/ml
8,0 mg/ml
CV: ± 2% (todo dentro el rango de concentración detectable)
Proteína, cuantificada por Lowry modificado
0,2 mg/ml
4,0 mg/ml
CV: ± 2% (dentro del rango de concentración detectable Todos)
Proteína, cuantificada por el método de Bradford
100 ug/ml
8000 ug/ml
El rango de concentración es 100- Cuando la concentración es 500 ug/ml, la SD es ± 25 ug/ml
Cuando la concentración es mayor que 500 ug/ml, el CV es ± 5%
Proteína, cuantificada por el método Mini Bradford
15 ug/ml
100 ug/ml
Cuando el rango de concentración es de 15-50 ug /ml, la SD es ± 4 ug/ml
Cuando la concentración es mayor a 50 ug/ml, el CV es ± 5%
3. >
1. Rango de longitud de onda: 190-840 nm;
2, Precisión de longitud de onda: 1 nm;
3. Resolución: <1,8 nm (FWHM a Hg 253,7 nm); /p>
4. Otros: longitud de trayectoria óptica de 1 mm (se puede ajustar automáticamente a 0,05 mm);
5. Límite de detección inferior: 2 ng/μl (dsDNA); >6. Límite superior de detección: 15000 ng/μl (ADNds);
7. Precisión de absorbancia: 0,002 de absorbancia (trayecto óptico de 1 mm);
8. a 0,76 a 257 nm);
9 rango de absorbancia: 0,02-300 (equivalente a un recorrido óptico de 10 mm);
10. >
11. Volumen: 14cm×20cm.
4. Ejemplos de uso:
ADNds: haga clic en Ácido nucleico en la pantalla principal y la computadora y el instrumento se conectarán automáticamente. Prepare la solución de acuerdo con el líquido en el que se disuelve el ADN (asegúrese de confirmar que el ADN esté disuelto en agua secundaria, tampón TE o el conjunto de tampón de elución del kit. Saque 1,5 ul y apúntelo en la tabla de detección). baje la parte superior del brazo y luego presione En blanco. Seleccione Tipo de muestra en la esquina superior derecha y seleccione ADN-50, ingrese el nombre de la muestra en la posición ID de muestra, mezcle la muestra, saque 1,5 ul y apúntelo en la mesa de detección, baje la parte superior del brazo y luego presione Medir.
5. Clasificación de resultados:
El software NanoDrop2000 preguntará dónde se guardará el archivo al comienzo de la detección. Si no se especifica, el archivo se almacenará en el archivo del usuario anterior. .
6. Precauciones:
1. Utilice papel limpiador de lentes (tipo Kimwipe) para limpiar la mesa inmediatamente después de la detección. Primero, tome una pieza para absorber el líquido en las encimeras superior e inferior, luego doble la superficie de la toallita de laboratorio que ha absorbido la muestra hacia el interior. Después de doblarla cuatro veces, limpie la encimera varias veces en una dirección (5 veces). para ADN y 20 veces para Proteínas).
2. La misma gota de líquido solo se puede detectar una vez. Si desea cuantificar la misma muestra repetidamente, limpie la gota anterior y saque una nueva gota para su detección.
3. Básicamente, las muestras de ácido nucleico se pueden medir usando 1~2ul. Dependiendo de las características de volumen de cada líquido, habrá diferentes requisitos de volumen. En principio, no debe exceder los 2ul. Y utilice una pipeta de 2 ul para evitar que un volumen insuficiente provoque que la columna de líquido no se forme por completo. Sólo se deben detectar muestras de proteínas utilizando 2ul debido a las características del cromógeno y de la propia proteína.
4. Cuando el software muestre un mensaje de error, léalo atentamente y siga las instrucciones para solucionar el problema. La situación más común es que la columna de líquido no se forme correctamente durante el proceso de detección y el software mostrará el siguiente mensaje. Primero puede observar a simple vista si la columna de líquido no está completamente conectada a las mesas superior e inferior, o si hay burbujas en la muestra. Después de levantar el brazo superior, limpie la gota de muestra y luego detecte nuevamente. Si es necesario, el volumen de la muestra se puede aumentar a 2ul.
5. No utilizar muestras de corrosión que contengan Ácido Fluorhídrico (HF), se pueden utilizar otros líquidos no corrosivos.
Marca:
NanoDrop 2000c
Todas las características del NanoDrop 2000 más las funciones de cubeta están integradas en el mismo instrumento
Micro base avanzada Tecnología de soporte
Modo dual: elija cubeta o base
Rango de concentración más amplio, puede medir concentraciones muy bajas o muy altas
La funcionalidad del plato colorimétrico permite la medición cinética (tiempo o estudios de tiempo/temperatura) y mediciones de cultivos celulares (OD 600)
Calentamiento: 37°C, ±0,5°C
Agitación: 150 a 850 rpm
Z -Altura: 8,5 mm
Tamaño de cubeta: 12,5 mm x 12,5 mm, hasta 48 mm
Ruta óptica: 10, 5, 2 y 1 mm
Tipo: Cubeta blindada
Rango de absorción: 0,008 a 1,5
Tiempo de medición: <3 segundos
Peso: 2,1 kg
UL/CSA y CE