¿Quién ha realizado cultivo primario de adipocitos?

Protocolo 23.12 Cultivo primario de adipocitos

Materiales experimentales

Colagenasa DMEM-ADMEM-B ratas Sprague-Dawley macho

Reactivos, kits

tampón KRBH tampón KRBH-A

Instrumentos, consumibles

Placa de Petri tubo de centrífuga cónico tubo de polipropileno poli de baja densidad Frasco acrílico, punta de filtro de nailon, tijeras de disección, Pinzas Perry, caja de plástico, guillotina, pipeta

Pasos experimentales

1. Extracción de la almohadilla de grasa epididimal

1. Anestesiar ratas (ratas macho Sprague-Dawley: 145~170 g, cepa CD (Charles River Breeding Laboratories)) en una caja de plástico con una mezcla de 70% CO2 y 30% O2?.

2. p>

3. Remoje el cuerpo del ratón en etanol al 70% durante un tiempo.

4. Intente eliminar la almohadilla de grasa epididimal en condiciones estériles. un par de tijeras de disección para diseccionar la piel del abdomen inferior y exponer el peritoneo

(b) Utilice otro par de tijeras de disección para diseccionar el peritoneo y luego utilice unas pinzas de Perry para tirar del testículo hacia arriba. p>

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(c) Cortar la almohadilla grasa del epidídimo, teniendo cuidado de preservar los vasos sanguíneos.

5. Transferir el tejido al laboratorio de cultivo para colagenasa (en 2). ml de tampón KRBH, añadir 20 mg/ml de colagenasa y luego filtrar con un filtro de 0,22 μm) digerir y lavar

6. Colocar 4 g de almohadilla grasa (equivalente a 8 almohadillas de grasa epididimal) en el recipiente. 4 ml de tampón KRBH (solución de Krebs-Ringer, pH 7,4, suplementado con NaHCO3 10 mmol/l, HEPES 30 mmol/l (Sigma), adenosina 200 nmol/l (Boche) y BSA al 1 % (p/v, Intergen). Al preparar 1 litro de tampón KRBH, utilice 7 g de NaCl, 0,55 g de KH2PO4, 0,25 g de MgSO4·7H2O, 0,84 g de NaHCO3, 0,11 g de CaCl2, 7,15 g de HEPES, 10 g de BSA, 1 ml de adenosina de 200 μmol/l y agregue agua ultrapura. a 1 L. Luego, dispensar en frascos de 100 ml. Calentar a 37°C y ajustar el pH a 7,4 (37°C) en frascos de polipropileno de baja densidad de 30 ml.

7. trozos de tejido con un diámetro de aproximadamente 2 mm.

8. Coloque los trozos de tejido en la botella y luego agregue 1 ml de solución de colagenasa. Incubar en una coctelera de baño de agua a 37 ° C durante aproximadamente 1 h hasta que la mezcla de células forme una consistencia cremosa.

9. Después de la digestión con colagenasa, añadir 4 ml de tampón KRBH (37°C) al frasco.

10. Mezclar las células en el frasco agitando y luego utilizar un filtro de nailon con un tamaño de poro de 250 μm (un tamaño de poro de 250 μm, colocado en un soporte o embudo) para filtrar suavemente las células. células en un tubo de centrífuga cónico de 50 ml.

11. Lavar las células añadiendo 30 ml de tampón KRBH (37°C) al tubo de centrífuga. Centrifugar brevemente (200 g) en una centrífuga de mesa y luego aspirar el sobrenadante con una pipeta. Observe los adipocitos flotando sobre el tampón acuoso.

12. Lavar las células añadiendo 40 ml de tampón KRBH, centrifugar y eliminar el sobrenadante. Repita este paso 1 vez.

13. Utilice 40 ml de DMEM-A (DMEM, pH 7,4, agregue 25 mmol/L de glucosa, 2 mmol/L de glutamina, 200 nmol/L de (R)-N6-(l-metil-2). -feniletil) adenosina (PIA, Sigma), 100 μg/ml de gentamicina y 25 mmol/L de HEPES Dispensar en 100 ml y calentar a 37 °C (37 °C) antes de usar.

14. Suspender las células flotantes en aproximadamente 40% de citocrito DMEM-A.

2. Cultivo primario de adipocitos

15. Utilice una pipeta de gran calibre de 200 μl para transferir 2 ml de suspensión de DMEM-A con citocrito al 40 % a una placa de cultivo de 60 mm.

16. Colocar la placa de cultivo en una incubadora humidificada e incubar durante 1,5 horas a 37°C y 5% de CO2.

17. Añadir 5 ml de DMEM-B (DMEM-A, más 7% de BSA) al plato de cultivo.

En este punto, se debe realizar un experimento de absorción de glucosa [Quom 1998] para comprobar la viabilidad celular.

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Revista de la Universidad de Ciencias Médicas Sun Yat-sen (AcadJSUMS), 2001, 22(6): 443~446443

Cultivo primario de preadipocitos humanos

Wang Zhuchen1, Liu Jianzhong2, Li Yan2, Yang Dongzi1, Kuang Jianqian1

(¿Universidad Médica Sun Yat-Sen? 1. Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital Memorial Sun Yat-sen, 2. Sección de Investigación y Enseñanza de Biología, Guangzhou, Guangdong? 510120)

Resumen?Resumen:? Objetivo Establecer un método de cultivo primario de preadipocitos humanos para estudiar más a fondo las características biológicas de la hiperplasia del tejido adiposo humano. Método: Se seleccionó tejido adiposo abdominal de adultos y se cultivaron células prismáticas utilizando el método de cultivo de células digestivas primarias. Al mismo tiempo, se tomó tejido de piel y se cultivó en fibroblastos como control. Resultados: Las células prismáticas cultivadas tenían una composición uniforme, una proliferación vigorosa y una alta tasa de diferenciación. La observación de los cambios dinámicos en la morfología, la curva de crecimiento y los métodos de extracción y tinción de grasa Oil Red O demostraron que eran preadipocitos funcionalmente activos y que todo el proceso de su proliferación se reprodujo in vitro. ?Conclusión En el tejido adiposo maduro, existen preadipocitos que pueden diferenciarse en maduros y producir grasa. Dado que los adipocitos son una de las células diana clásicas de la insulina, este experimento sentó las bases para futuras investigaciones sobre enfermedades relacionadas con la obesidad y la resistencia a la insulina, como el síndrome de ovario poliquístico.

Palabras clave: preadipocitos; cultivo celular; tejido adiposo

Número CLC: Q254, R711.75? Código de identificación del documento: A? -04

Cultivo primario de preadipocitos humanos

WANGZhu?chen1,LIUJian?zhong2,LIYan2,YANGDong?zi1,KUANGJian?quan1

(1.Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital Memorial SunYat?sen, 2.Departamento de Biología,

Universidad de Ciencias Médicas SunYat?sen, Guangzhou 510120, China)

Resumen: Objetivo Establecer un método primario de cultivo de predipocitos humanos para comprender mejor las propiedades de la hiperplasia del tejido adiposo humano Métodos Utilizando cultivo celular primario, se cultivaron células similares a fibroblastos de tejido adiposo dominante adulto. También se cultivaron fibroblastos de dermis humana adulta para que sirvieran como control. Resultados Las células eran altamente homogéneas, proliferativas y tenían una alta tasa de diferenciación. En condiciones bajo control, los preadipocitos reprodujeron su proceso de hiperplasia in vitro. Conclusión En el tejido adiposo humano maduro, existen preadipocitos que pueden diferenciarse de los adipocitos maduros. Dado que los adipocitos son un tipo de estoinulina diana clásica, este estudio sentó las bases para investigar más a fondo la obesidad y las enfermedades resistentes a la insulina, como el síndrome poliquísticoovario.

Palabras clave: preadipocitos;cultivo celular;tejido adiposo

Adipocitos Es una de las células diana clásicas de la insulina y está estrechamente relacionada con la investigación sobre la obesidad y las enfermedades relacionadas con la resistencia a la insulina, como el síndrome de ovario poliquístico. años, ha recibido mucha atención en el campo de la endocrinología ginecológica.

Ver. Los preadipocitos son un tipo de células precursoras especializadas con la capacidad de proliferar y diferenciarse en adipocitos. Su existencia y función continúan durante toda la vida de una persona. Los preadipocitos se cultivaron en tejido adiposo humano, sentando las bases para futuras investigaciones.

Fecha de recepción: 2001-04-23

Proyecto del fondo: Proyecto del fondo de investigación científica del Departamento de Salud Provincial de Guangdong (2001189)

,;1? Materiales y Métodos 1.1: Fuente del tejido: Se seleccionaron pacientes con peso normal que se sometieron a recanalización de las trompas de Falopio en la sala de endocrinología ginecológica de nuestro hospital desde septiembre de 2000 hasta enero de 2001. Edad entre 20 y 40 años, buen estado de salud, sin otras enfermedades agudas o crónicas. Se extrajeron tejido adiposo subcutáneo y tejido cutáneo durante la laparotomía durante la operación.

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1.2? Materiales de prueba

1.2.1? ¿Suministros de prueba principales y reactivos químicos? Medio DMEM/F?12 (1!1), Mycoplasma -las soluciones madre de suero bovino fetal libre, colagenasa de tipo β, Hepes, transferrina humana, penicilina y estreptomicina se adquirieron de GIBCO. La biotina, el pantotenato, la hidrocortisona, la triyodotironina (T3) y la 3?isobutil?1?metilxantina son todos productos de SIGMA; Compañía. La albúmina sérica bovina se adquirió de Roche. Los reactivos inorgánicos necesarios para la prueba se compraron en el Departamento Mayorista de Pruebas Químicas de la Compañía Farmacéutica de Guangzhou y todos eran reactivos analíticamente puros. Los frascos de cultivo se adquirieron en KORNING Company.

1.2.2? ¿Preparación del medio de cultivo y reactivos principales? ¿Medio de cultivo A [1] Journal of Sun Yat-sen University of Medical Sciences (AcadJSUMS), 2001, 22 (6) Se elabora el medio de cultivo A? en una suspensión celular y se inocula en un matraz de cultivo de 25 cm2, la densidad es de 3 a 10 células por centímetro cuadrado. Colóquelo a 37# e incúbelo en una incubadora con CO2 al 5% durante 16 horas. sustancias en el matraz de cultivo con PBS y reemplazar con el medio de cultivo C induce y mantiene la diferenciación de adipocitos, y se reemplaza con medio B después de 3 días, y el medio B se reemplaza cada 2 a 3 días a partir de entonces. 1.3.2 Tinción histológica de preadipocitos humanos y fibroblastos de la piel: corte el cubreobjetos en un tamaño de 0,5 cm a 1,0 cm, colóquelo en un frasco de cultivo al inocular y retire el frasco de cultivo cada 2 o 3 días después de que las células se adhieran a la pared. Retire el tinte de la botella. Coloque el lado con los adipocitos hacia arriba, sumérjalo en un volumen de tampón salino isotónico de formaldehído al 10% durante 10 minutos, luego colóquelo en tampón PBS, enjuáguelo suavemente durante un rato y déjelo en posición vertical. La humedad restante fluye hacia el borde y se. absorbido con papel absorbente. Después de secarlos ligeramente, los preadipocitos humanos se tiñeron usando el método de tinción con gota de Sudán y la contratinción con hematoxilina de Mayer para los núcleos celulares, y luego se montaron sobre gelatina de glicerina. Los fibroblastos de la piel se tiñeron usando hematoxilina-eosina convencional, se deshidrataron y se hicieron transparentes, luego se montaron con neutral; resina y se monta bajo un microscopio óptico. Observe y tome fotografías para conservar los resultados.

1.3.3 ¿Dibujo de la curva de crecimiento celular? Inocular cantidades iguales de suspensión celular en 24 frascos de cultivo, dividirlos aleatoriamente en 8 grupos, 3 frascos en cada grupo, y probar cada frasco en un grupo cada 2. días Tome el promedio del número total de células en los tres matraces, y así sucesivamente hasta el final del octavo grupo. El método de recuento de células se basó en experimentos médicos de biología celular [3].

1.3.4 Método de tinción y extracción de Oil Red O para determinar el contenido de grasa intracelular El método de inoculación es el mismo que el 1.3.3, según Ramírez[2] 4: ¿Tomar 5g de DMEM/F?12 polvo de cultivo de acuerdo con las instrucciones, agregue suero bovino fetal para obtener una fracción de volumen del 10% y ajuste el volumen a 500 ml con agua destilada. Medio B: tome 10 g de polvo de cultivo DMEM/F?12 de acuerdo con las instrucciones; concentraciones finales de 15 mmol/LNaHCO3 y 15 mmol/LHep?es, 33 µmol/L de pantotenato, 17 µmol/L de transferrina humana, 100000 U/L de penicilina, 0 µ1 g/L de estreptomicina, 100 nmol/L de hidrocortisona, 60 nmol/L de insulina. , 0?2nmol/LT3, ajustar el volumen a 1000 ml con agua destilada Medio C: tomar 200 ml de medio A, agregar 3?isobutil?1?metilxantina para obtener una concentración final de 0?25 mmol/L; tipo ?) 150 mg, albúmina sérica bovina 2 g, solución salina tamponada con fosfato (PBS) 0,01 mol/l, diluir a 100 ml de tampón de lisis de glóbulos rojos: pesar cantidades apropiadas de NH4Cl, K2HPO4 y EDTA para obtener sus concentraciones finales respectivamente; ​​son 154 mmol/L, 5-7 mmol/L y 0-1 mmol/L, y el agua destilada

lleva el volumen a 250 ml. El valor de pH de las soluciones anteriores se ajustó a 7?4~7?6, se esterilizó mediante filtración con presión positiva a través de una membrana de filtro microporosa de 0?22 µm y se almacenó en alícuotas de -30#. Determinación mediante métodos como el fluido de trabajo Oil Red O [2].

El cultivo se fijó con formaldehído al 10% en tampón salino isotónico durante 1 hora y se enjuagó con agua destilada. Tome 10 ml de solución de trabajo Oil Red O y tiña la superficie del cultivo hacia abajo. Después de 2 horas, vierta la solución de trabajo Oil Red O en la botella y enjuague la botella de cultivo varias veces con agua destilada hasta que se limpie. flota completamente limpio. Coloque la botella de cultivo teñida en una incubadora de 32 #, evapore el agua en la botella y luego agregue 1 ml de alcohol isopropílico. La solución de tinte extraída se retira inmediatamente con una pipeta y se mide la absorbancia a una longitud de onda de 510 nm. un espectrofotómetro HITACHIG2000. : Pese 4,2 g de Oil Red O y disuélvalos en 1200 ml de isopropanol y déjelo reposar a temperatura ambiente durante la noche. Analice y filtre con papel de filtro. Recoja el filtrado y agregue 900 ml de agua triple destilada. Déjelo reposar durante la noche nuevamente en el n.° 4. filtrarlo dos veces y dejar reposar a temperatura ambiente hasta su uso posterior. 1.2.3 Instrumentos: incubadora de CO2, microscopio invertido, etc. 1.3 Método Método

1.3.1 Cultivo primario de preadipocitos humanos y fibroblastos de piel [1] Durante la operación, se extrajeron aproximadamente 60 g de tejido adiposo y aproximadamente de 0,5 cm a 3 cm de cultivos de fibroblastos. se realizaron como controles. Lavar con PBS, separar y eliminar los componentes de fibra y los vasos sanguíneos visibles a simple vista en el tejido adiposo. Retire la epidermis y la grasa subcutánea del tejido de la piel, córtelo en trozos pequeños de aproximadamente 2 mm ~ 2 mm, agregue jugo digestivo y coloque. a 37#, fracción de volumen 5% CO2 Digestión en incubadora. Después de 15 horas, se centrifuga durante un breve período a 200 µg para eliminar las células grasas flotantes y el medio de cultivo. Las células depositadas se preparan nuevamente en una suspensión celular con tampón de lisis de glóbulos rojos. Se incuba a 37# durante 10 minutos para eliminar el rojo contaminado. células sanguíneas.Termina en 150?2? Resultados 2.1 La observación morfológica de preadipocitos humanos cultivados primarios y fibroblastos de piel mostró que después de la adhesión, las células eran inicialmente pequeñas y redondas con una gran proporción núcleo/plasma (Figura 1.1). Observadas en 4 días, de tipo huso, estas células prismáticas proliferan en grandes cantidades alrededor de los 7 días, y el área alcanza la mitad del fondo de la botella de cultivo, y luego comienzan a acumular partículas de grasa (Figura 1? 2). Se puede observar que las células cambian gradualmente de prismáticas a ovaladas o redondas a los 9 días (Figura 1?3), con acumulación de partículas de grasa

Número 6 ¿Cultivo primario de humanos? preadipocitos 445 adipocitos (Figura 1?4). Los adipocitos cultivados in vitro son de mayor tamaño y tienen membranas celulares más delgadas. El contorno de la membrana no es liso, desigual y arrugado. Hay una gran cantidad de gotitas redondas de lípidos en el citoplasma, que varían en tamaño y en su mayoría están dispersas. También hay una gran cantidad de pequeñas gotas de lípidos que entran en contacto para formar lípidos grandes. En el caso de las gotas, los núcleos todavía están ubicados en el borde, mientras que la tasa de proliferación de los fibroblastos de piel cultivados al mismo tiempo es similar, pero lo son. siempre largo en forma de prisma sin acumulación de gotitas de lípidos (Figura 2?1, Figura 2?2).

2.2 Curvas de crecimiento de preadipocitos humanos y fibroblastos cutáneos

A partir de las curvas de crecimiento, se puede observar que los tiempos de duplicación de los preadipocitos humanos (Figura 3.1) y fibroblastos cutáneos (Figura 3.2) son de 60 h. y 55h respectivamente

. 3. Discusión 3.1 La importancia científica del cultivo de preadipocitos humanos en el campo de la endocrinología ginecológica Los adipocitos son un componente importante del tejido adiposo y también son el órgano principal de sus funciones. La investigación contemporánea cree que los adipocitos en el tejido adiposo son muy activos y que el número, la forma y el contenido de grasa intracelular de las células cambian dinámicamente y permanecen durante toda la vida. Se cree que la obesidad es el resultado de una proliferación y diferenciación descontrolada de los adipocitos. En la actualidad, la obesidad se ha convertido en una enfermedad estrechamente relacionada con el campo de la endocrinología ginecológica. La obesidad puede producir resistencia a la insulina/hiperinsulinemia, y la resistencia a la insulina/hiperinsulinemia es una enfermedad común en muchas enfermedades o afecciones clínicas, especialmente enfermedades endocrinas y metabólicas comunes, como. La diabetes, la hipertensión y la aterosclerosis tienen diferentes señales de peligro, por lo que se han convertido en los últimos años en un foco de interés para la investigación entre muchas disciplinas médicas. En particular, los resultados de las investigaciones de los últimos años

Fig.3.1? Curva de crecimiento de los preadipocitos humanos

Fig.3.1 ¿Curva de crecimiento de los preadipocitos humanos en cultivo? /la hiperinsulinemia también se relaciona con El hiperandrogenismo se asocia con la anovulación en mujeres en edad fértil. El síndrome de ovario poliquístico es una afección clínica común.

Aproximadamente entre el 5 % y el 10 % de las mujeres en edad fértil padecen esta enfermedad. A menudo va acompañada de obesidad y la causa se desconoce. Actualmente se cree que el síndrome de ovario poliquístico es una enfermedad endocrina y metabólica caracterizada por la resistencia a la insulina secundaria a la resistencia a la insulina que juega un papel importante en la aparición de signos de hiperandrógeno y que conduce a la infertilidad [4].

Los adipocitos son una de las células diana sensibles a la insulina

Fig.3.2?Curva de crecimiento para fibroblastos de piel humana en cultivo

Fig.3.2?Curva de crecimiento para fibroblastos de piel humana en cultivo, así se realizó el estudio de su potencial mecanismo de resistencia a la insulina tiene especial importancia clínica. Cultivo de preadipocitos in vitro

Puede comprender completamente todo el proceso de aparición y proliferación del tejido adiposo, y puede observar directamente la regulación de varios factores en este proceso y estudiar su mecanismo. Es un modelo ideal para. estudiando el tejido adiposo. Aunque se han establecido líneas celulares derivadas de preadipocitos de ratón en el extranjero, como 3T3?L1, 3T3?F442A, series ob17, etc., hasta el momento no se han establecido líneas celulares de preadipocitos [5], por lo que los esfuerzos adicionales de investigación han sido limitados. .

3.2? Características biológicas de los preadipocitos humanos cultivados in vitro

En la actualidad, existen aproximadamente dos tipos de sistemas de cultivo in vitro de preadipocitos en el país y en el extranjero. células componentes (fracción estromalvascular?cular, SVF), que es el preadipocito clásico. Van et al. [6] estudiaron sistemáticamente la FVS y formaron una teoría completa de los preadipocitos. Trataron el tejido adiposo extirpado con colagenasa y luego centrifugaron la suspensión de tejido. El componente vascular estromal del sedimento fue SVF. Cultivaron el SVF y lo compararon con los fibroblastos cultivados. Los dos cultivos proliferaron a una velocidad similar. tiempo de duplicación de aproximadamente 55 horas. Al comparar las células bajo el microscopio, se encontró que el contenido de grasa en las células aumentó rápidamente después de 9 días de cultivo y alcanzó un pico alrededor de los 16 días, mientras que se encontró que el contenido de grasa en las células durante el crecimiento de los preadipocitos y los fibroblastos de la piel. cambio a 2,3°C. Sólo hay una acumulación mínima de grasa dentro de las células (Figura 4)

. Figura 4? Cambios en el contenido de grasa intracelular durante el crecimiento de preadipocitos y fibroblastos de la piel. No hay gotas de lípidos en el citoplasma, o solo hay una pequeña cantidad. Esto prueba que los SVF son preadipocitos con potencial para proliferar y diferenciarse en adipocitos. Los resultados de este estudio experimental son consistentes con esto y cumplen con los tres estándares propuestos en la literatura [6]. Además, en los últimos años, se ha informado que el método de combinar la adhesión de bloques de tejido adiposo y el cultivo del techo también ha tenido éxito [7]. Los preadipocitos obtenidos mediante este método son diferentes de los SVF y pueden derivar de una isla de células que se encuentra en los adipocitos maduros encontrados por Carraro et al. Sin embargo, este método utiliza cultivo de suero y se incuba con adipocitos maduros, por lo que no es adecuado como modelo de investigación in vitro para determinadas citoquinas secretadas por adipocitos maduros.

El cultivo de preadipocitos ha aclarado la relación entre su proliferación y diferenciación. Actualmente se cree que se trata de una relación continua de ¿pausa del crecimiento?¿reanudación del crecimiento celular? La detención del crecimiento es un primer paso necesario. Después, estas células se vuelven a dividir al menos una vez antes de continuar transformándose en adipocitos maduros. Y con el tiempo, aparece el marcador tardío de ARNm de glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (GPDH), que también es la enzima limitante de la velocidad necesaria para la síntesis de grasas, y finalmente se convierte en adipocitos. Nuestro estudio también observó que las células comenzaban a crecer tras un periodo de incubación tras la adhesión, proliferaban masivamente alrededor de los 3 o 5 días, y comenzaban a acumular partículas de grasa al cabo de 1 semana. Después de 2 semanas de cultivo, los adipocitos se diferenciaron en múltiples gotitas de lípidos o gotitas de lípidos únicas, de acuerdo con los informes de la literatura.

El método de tinción y extracción Oil Red O puede cuantificar fácil y rápidamente la tasa de conversión de preadipocitos cultivados in vitro. La literatura informa que su precisión y sensibilidad son similares a las de medir GPDH, una enzima marcadora en el proceso de diferenciación de los preadipocitos [2]. Por lo tanto, se utiliza a menudo para identificar preadipocitos cultivados in vitro. En preadipocitos cultivados in vitro, bajo la acción de insulina, hidrocortisona, etc., la GPDH comienza a elevarse y aumenta rápidamente, alcanzando un pico alrededor de los 8 días y manteniéndose en un nivel alto [2]. Utilizamos el método de extracción y tinción Oil Red O para la investigación. Los resultados mostraron que los preadipocitos comenzaron a acumular grasa en el tercer día de cultivo. La cantidad de acumulación aumentó significativamente después de 1 semana y alcanzó un pico a las 2 semanas. los resultados morfológicos del cultivo 1 Las partículas de grasa comienzan a aparecer en las células después de unas semanas.

También muestra que la enzima aparece primero y la grasa aparece después. El aumento significativo en el contenido de grasa intracelular ocurre aproximadamente 1 semana después de la aparición de GPDH, lo que concuerda con los informes de la literatura [2].

3.3?Características de la tecnología de cultivo de preadipocitos humanos

El tejido adiposo deriva del tejido conectivo reticular original y está compuesto por tejido conectivo y adipocitos, siendo los adipocitos el principal componente celular, en. Además, también contiene células reticulares, células mesenquimales, células tisulares, células endoteliales, etc. Tanto los adipocitos como los fibroblastos provienen del mesodermo, por lo que los adipocitos y los fibroblastos cultivados tienen características similares [9] Journal of Sun Yat-sen Medical University (AcadJSUMS), 2001, 22 (6) Existen diferencias en las condiciones de cultivo externo [10]. Requiere la acción de factores adipogénicos. Las sustancias actualmente conocidas de este tipo incluyen: insulina, glucocorticoides, tiroxina, hormona del crecimiento, transferrina, 3?isobutil?1?metilxantina y fibronectina. El medio de cultivo generalmente se prepara con DMEM y F12 en una proporción de 1:1, con un número moderado de células. Las células no están muy firmemente adheridas durante la inoculación inicial y los movimientos deben ser suaves para evitar que las células floten. Cuanto más joven sea el material seleccionado, más fácil será su cultivo. Los seres humanos generalmente utilizan operaciones quirúrgicas para eliminar el tejido graso abdominal. Si se utiliza una jeringa para aspirar, las células se dañan fácilmente y se reduce la tasa de supervivencia.

(Ver el inserto 2 para las Figuras 1 y 2 de este artículo) Referencias: [1] HaunerH, PetruschkeTH, RussM, et al. Efecto del factor de necrosis tumoral alfa (TNF?) en el transporte de glucosa y el metabolismo de los lípidos de células grasas humanas recién diferenciadas en cultivos celulares [ J]. Dibetologia, 1995, 38 (7): 764. [2] Ramírez Zacarias JL, Castro Muñozledo F, Kuri Har cuch W. Cuantificación de la conversión adiposa y triglicéridos mediante tinción de lípidos intracitoplasmáticos con aceite rojo O [J]. , 97 (6): 493. [3] Zhao Gang, Liu Jianzhong. Experimentos y ejercicios de biología celular médica [M]. Beijing: Science Press, 1999.35. [4] Dunaif A. Insulinactioninthepolycysticovarysyndrome [J]. Endocrinol&MetabClinNorAm, 1999, 28 ( 2):341.[5]BillingsE,MayJW.Historicalreviewandpresentsta?tusoffreefatgraftautotrasplantationinplasticandre?constructivesurgery[J].PlastReconstr Surg ,1989,83(2):368.[6]VanRLR,BaylissCE,RoncariDAK.Cytologicalandenzymologicalcharacterization ofadulthumanadipocyteprecursorsinculture[ J].JClinInvest, 1976,58(9):699.[7]Zhu Xiaohai, He Qinglian, Lin Zihao. Cultivo de preadipocitos humanos y establecimiento de modelo de proliferación y diferenciación[J].Revista China de Cirugía Plástica y Reconstructiva de Quemaduras, 1999,15(3). :199.[8]CarraroR, LiZH, JohnsonJE.Isletsofpreadipocitosaltamente comprometidos con la diferenciación en cultivo de dipocitos adherentes[J].CellTissRes,1991,264(2):243.[9] Liu Qing, Deng Yiping. interacción con el activador del plasminógeno tisular [J]. Journal of Sun Yat-sen Medical University, 1992, 13(4):18.[10] Zhu Yongyuan, Li Tianzeng, Su Aiyun, et al. Cultivo in vitro de células epidérmicas humanas [ J]. Revista de la Universidad Médica Sun Yat-sen, 1998, 19 Suplemento: 34.(?,)