Método de extracción de plásmido
Según los métodos de operación específicos, se puede dividir en método de craqueo alcalino, método de ebullición, método de palillo, etc.
Bajo la acción del hidróxido de sodio (pH 12,0-12,6 ambiente alcalino) y el detergente SDS, las proteínas bacterianas se desnaturalizan, las células se rompen, el ADN de los cromosomas bacterianos se desnaturaliza, los enlaces de hidrógeno del ADN de doble cadena se rompen y ADN La estructura de doble hélice se destruye y se deforma.
Sin embargo, debido al peso molecular relativamente pequeño del ADN plasmídico, aunque el ADN de bucle cerrado está desnaturalizado, todavía se encuentra en un estado topológicamente entrelazado, mostrando una estructura superhélice circular incluso en condiciones de pH alcalino alto. , los dos complementarios La cadena tampoco se separa del todo.
En las condiciones de ajustar el pH a neutro y en presencia de un alto contenido de sal, el ADN plásmido desnaturalizado vuelve a su configuración original, mientras que la mayoría del ADN cromosómico y las proteínas son difíciles de renaturalizar e interactuar con los restos celulares. proteínas, SDS, etc. forman complejos insolubles.
Mediante la precipitación centrífuga, se puede eliminar la alteración celular, el ADN cromosómico y la mayoría de las proteínas, mientras que el ADN y ARN plasmídico con menor peso molecular relativo permanecen en estado soluble. El ARN mixto se puede eliminar con RNasa y luego tratar con fenol/cloroformo para eliminar las proteínas residuales. El ADN plasmídico se precipitó adicionalmente mediante centrifugación en presencia de sal y etanol.
Información ampliada
Clasificación:
Según si los plásmidos pueden pasar la conjugación bacteriana, se pueden dividir en plásmidos conjugativos y plásmidos no conjugativos. Los plásmidos conjugativos transportan genes implicados en la transmisión conjugativa. Los plásmidos no conjugativos se transmiten bajo ciertas condiciones mediante inducción o transducción de sus plásmidos conjugativos existentes.
Según el tipo de replicación del plásmido en las bacterias, se puede dividir en dos categorías: tipo de control estricto y tipo de control relajado. El sistema enzimático de replicación del plásmido replicante está estrictamente controlado y funciona en la replicación del ADN cromosómico. Solo puede replicarse en una determinada etapa del ciclo celular cuando el cromosoma celular deja de replicarse, el plásmido ya no se replicará.
El sistema replicasa de los plásmidos con control de replicación relajado no se ve afectado por el sistema replicasa del ADN cromosómico y puede replicarse en cualquier momento durante todo el ciclo de crecimiento celular. El plásmido puede continuar replicándose cuando la replicación cromosómica se ha detenido.
Según la incompatibilidad de los plásmidos se puede dividir en incompatibilidad y compatibilidad. La incompatibilidad se refiere al fenómeno de que plásmidos estructuralmente similares y estrechamente relacionados no pueden existir de manera estable en la misma bacteria huésped, y lo contrario es la compatibilidad. A menudo se utiliza en investigaciones epidemiológicas.
Enciclopedia Baidu-Extracción de plásmidos