¿Cuáles son los métodos comúnmente utilizados en microscopía inmunoelectrónica?
La observación directa de la reacción de unión entre antígeno y anticuerpo bajo un microscopio electrónico se denomina microscopía electrónica de inmunoadsorción o microscopía inmunoelectrónica. Tiene las ventajas de precisión, velocidad, alta sensibilidad y fácil operación. Incluso si el título de antisuero es muy bajo, se puede obtener una respuesta más obvia. Los métodos comúnmente utilizados de microscopía inmunoelectrónica son los siguientes.
1 Método de captura
(1) La superficie de la película de malla de cobre recubierta con antisuero se recubre con gotas de antisuero (la dilución del antisuero debe determinarse mediante la primera prueba). 5 ~10 min Después de la reacción, cubrir con una tapa para evitar que las gotas de antisuero se evaporen.
(2) Lavado: Enjuague la membrana de malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(3) Recubrimiento de la muestra: cubra las gotas del lixiviado del tejido enfermo sobre la película de malla de cobre durante 10 minutos y luego séquela.
(4) Lavado: Enjuague la malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(5) Tinción negativa: utilice acetato de peróxido de hidrógeno 2 para tinción negativa durante unos segundos y seque.
(6) Observación con microscopio electrónico: cuando los antígenos y los anticuerpos reaccionan, se pueden capturar más partículas en la malla de cobre. Puede aumentar la eficiencia de detección de virus de 10 a 100 veces. Este método funciona con partículas de virus de diversas formas.
2. Método de modificación
(1) La superficie de la malla de cobre recubierta de antisuero se cubre con gotas de antisuero (la dilución del antisuero debe determinarse mediante la primera prueba), 5~ 10 min Después de la reacción, cubrir con una tapa para evitar que se evaporen las gotas de antisuero.
(2) Lavado: Enjuague la membrana de malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(3) Recubrimiento de la muestra: cubra la película de malla de cobre con gotas del lixiviado del tejido enfermo durante 10 minutos y luego séquela.
(4) Limpieza: Enjuague la malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(5) Coloque la malla de cobre en el antisuero [la concentración es aproximadamente 50-100 veces mayor que la del antisuero utilizado en (1)] durante 10 minutos.
(6) Lavado: Enjuague la malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(7) Tinción negativa: Teñir el negativo con peróxido de hidrógeno acetato al 2% durante unos segundos y secar.
(8) Observación por microscopía electrónica Si el antígeno y el antisuero son positivos, habrá más partículas de virus que en el método de inmersión general. La superficie de las partículas de virus está cubierta con moléculas de anticuerpos y las partículas. son más grandes, lo que es adecuado para observar virus distintos de los esféricos.
3 Un método de modificación de proteínas
Este método es adecuado para antisueros con títulos bajos y es difícil juzgar los resultados mediante métodos de modificación generales. Cuando el anticuerpo se une a la proteína A, espesa la "capa" exterior de la partícula, lo que facilita su evaluación. Aumenta la eficiencia de detección de 1 a 2 veces en comparación con la captura. Los pasos de la operación son los siguientes:
(1) Cubra la superficie de la malla de cobre del antisuero con gotas de antisuero (la dilución del antisuero debe determinarse mediante la primera prueba) y cubra el reactivo después de 5 a 10 minutos. para prevenir antisuero Las gotas se evaporan.
(2) Lavado: Enjuague la membrana de malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(3) Recubrimiento de la muestra: cubra la película de malla de cobre con gotas del lixiviado del tejido enfermo durante 10 minutos y luego séquela.
(4) Lavado: Enjuague la malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(5) Sumergir en una solución de proteína 20 A y secar.
(6) Lavado con agua: Enjuague la malla de cobre con 10-30 gotas de agua destilada y séquela con papel de filtro.
(7) Tinción negativa: utilice acetato de peróxido de hidrógeno 2 para tinción negativa durante unos segundos y seque.
(8) Observación con microscopio electrónico.