Dónde producir el kit de ensayo cuantitativo de lipoproteína fosfolipasa A2 en plasma
Kit ELISA de lipoproteína fosfolipasa A2 (Lp-PLA2) humana
Instrucciones de uso
Este kit se utiliza para la detección cuantitativa in vitro de suero y plasma. , el contenido de lipoproteína fosfolipasa A2 (Lp-PLA2) humana en tejidos, sobrenadantes de células y muestras líquidas relacionadas.
l?Período de validez: 6 meses
l?Condiciones de almacenamiento: 2-8 ℃
l?Este kit es solo para investigación in vitro y no es para uso clínico Diagnóstico
Principio experimental
Este kit utiliza un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) tipo sándwich de un solo paso y doble anticuerpo. En los micropocillos recubiertos previamente con anticuerpo de captura de lipoproteína fosfolipasa A2 (Lp-PLA2), agregue la muestra, el estándar y el anticuerpo de detección marcado con HRP en secuencia, luego incube completamente y lave los pocillos. El sustrato TMB se utiliza para desarrollar el color. El TMB se convierte en azul bajo la catálisis de la peroxidasa y finalmente se convierte en amarillo bajo la acción del ácido. La profundidad del color se correlaciona positivamente con la lipoproteína fosfolipasa A2 (Lp-PLA2) humana en la muestra. Mida la absorbancia (valor OD) utilizando un lector de microplacas a una longitud de onda de 450 nm para calcular la concentración de la muestra.
Procesamiento y requisitos de la muestra
1. Suero: Colocar la muestra de sangre completa a temperatura ambiente 4 °C durante 2 horas o durante la noche, luego centrifugar a 1000 g durante 20 minutos, tomar el sobrenadante. y enviarlo para su prueba, o Almacenar a -20°C o -80°C, pero evitar congelarlo y descongelarlo repetidamente.
2. Plasma: Se puede utilizar ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) o heparina como anticoagulante. La muestra se puede centrifugar a 1000 g durante 20 minutos a 2 - 8 °C dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección. almacenarse a -20°C o -80°C, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.
3. Homogeneización del tejido: enjuague el tejido con PBS preenfriado (0,01 M, pH=7,4) para eliminar la sangre residual (los glóbulos rojos disueltos en el homogeneizado afectarán la medición) y pese el tejido. , y luego corte el tejido. Mezcle el tejido picado con el volumen correspondiente de PBS (la relación peso-volumen es generalmente 1:9, por ejemplo, 1 g de muestra de tejido corresponde a 9 ml de PBS y el volumen específico se puede ajustar según las necesidades experimentales). ), y grabarlo. Se recomienda agregar inhibidores de proteasa al PBS) en un homogeneizador de vidrio y triturar bien en hielo. Para lisar aún más las células del tejido, el homogeneizado se puede sonicar o congelar y descongelar repetidamente. Finalmente, el homogeneizado se centrifugó a 5000 xg durante 5-10 minutos y se tomó el sobrenadante para su detección.
4. Sobrenadante de cultivo celular u otras muestras biológicas: centrifugar a 1000 g durante 20 minutos, tomar el sobrenadante para analizarlo o almacenar la muestra a -20 °C o -80 °C, pero evite congelarla repetidamente y descongelación.
Nota: La hemólisis de la muestra afectará el resultado final de la prueba, por lo que la muestra no debe hemolizarse para esta prueba.
Procesamiento de muestras
1. Nuestra empresa solo es responsable del kit en sí y no es responsable del consumo de muestras causado por el uso del kit. Considere los posibles usos de la muestra. antes de su uso. Reserve suficientes muestras.
2. El contenido de la muestra debe predecirse antes del experimento. Si la concentración de la muestra es demasiado alta, la muestra debe diluirse para que cumpla con el rango de detección del kit y luego multiplicarse por el. factor de dilución correspondiente al calcular. Las muestras se diluyeron con 0,01 mol/l de PBS (PH = 7,0-7,2).
3. Si la muestra analizada no se encuentra entre las muestras enumeradas en las instrucciones, se recomienda realizar una prueba previa para verificar su eficacia, y se debe prestar atención a la retención de la muestra.
4. Los homogeneizados de tejido o extractos celulares preparados con tampón de lisis química pueden provocar sesgos en los resultados de las pruebas ELISA debido a la introducción de determinadas sustancias químicas.
5. Si la muestra es sobrenadante de cultivo celular, debido a muchos factores que interfieren en dichas muestras, como el estado de las células, el número de células, el tiempo de muestreo, etc., es posible que no se detecte.
6. Es posible que algunas proteínas naturales o proteínas recombinantes (incluidas las proteínas recombinantes procarióticas y eucariotas) no coincidan con los anticuerpos de detección y los anticuerpos de captura utilizados en este producto.
7. Se recomienda utilizar muestras frescas. El almacenamiento durante demasiado tiempo puede provocar degradación o desnaturalización de las proteínas, lo que provocará desviaciones en los resultados experimentales.
Reactivos y equipos necesarios pero no incluidos
1. Lector de microplacas (450 nm)
2. Inyector y pistola pulverizadora de alta precisión: 0,5- 10 uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL
3.?Termostato de 37 ℃
4.?Agua destilada o desionizada
Composición de la caja de reactivos
Observaciones:
1. Las concentraciones de los estándares son 24, 12, 6, 3, 1,5, 0 ng/mL
2. Se analizan muestras normales. Los valores de concentración normales de las muestras están dentro del rango de detección proporcionado por el kit. Durante el experimento, se pueden tomar muestras de 50 μL directamente para el muestreo. Cuando el valor de concentración de algunas muestras excede la concentración máxima del estándar, la muestra se puede diluir adecuadamente antes de realizar el experimento.
Notas
1. Siga estrictamente el tiempo y la temperatura especificados para calentar para garantizar resultados precisos. Todos los reactivos deben alcanzar una temperatura ambiente de 20-25°C antes de su uso. Los reactivos deben refrigerarse inmediatamente después de su uso.
2. Un lavado inadecuado de las placas dará lugar a resultados inexactos. Asegúrese de drenar la mayor cantidad de líquido posible de los pocillos antes de agregar el sustrato. No dejes que los microporos se sequen durante el proceso de calentamiento.
3. Retire el líquido residual y las huellas dactilares en el fondo de la placa, de lo contrario afectará el valor OD.
4. La solución cromogénica del sustrato debe ser incolora o de color muy claro. No se pueden utilizar soluciones de sustrato que se hayan vuelto azules.
5. Evite la contaminación cruzada de reactivos y muestras para evitar resultados erróneos.
6. Evite la exposición directa a la luz intensa durante el almacenamiento y el cultivo.
7. Equilibrar a temperatura ambiente antes de abrir la bolsa sellada para evitar que se condensen gotas de agua sobre las lamas frías.
8. Cualquier reactivo de reacción no debe entrar en contacto con disolventes blanqueadores ni con gases fuertes liberados por los disolventes blanqueadores. Cualquier ingrediente blanqueador destruirá la actividad biológica de los reactivos del kit.
9. No utilizar productos caducados.
10. Si existe la posibilidad de transmisión de enfermedades, todas las muestras deben manejarse y las muestras y el equipo de prueba deben manejarse de acuerdo con los procedimientos prescritos.
Preparación de reactivos
Después de sacar el kit del ambiente refrigerado, se debe equilibrar a temperatura ambiente antes de su uso.
Dilución de 20× Wash Buffer: Diluir 1:20 con agua destilada, es decir, 1 parte de 20× Wash Buffer por 19 partes de agua destilada.
Pasos de operación
1. Después de equilibrar a temperatura ambiente durante 20 minutos, saque los listones necesarios de la bolsa de papel de aluminio, selle los listones restantes en una bolsa ziplock y colóquelos. a 4°C.
2. Configure los pozos estándar y los pozos de muestra, y agregue 50 μL de estándares de diferentes concentraciones en cada pozo estándar.
3 Agregue 50 μL de la muestra a analizar. el pozo de la muestra; No agregue agujeros en blanco.
4. Excepto por los pocillos en blanco, agregue 100 μL de anticuerpo de detección marcado con peroxidasa de rábano picante (HRP) a cada uno de los pocillos estándar y de muestra. Los pocillos de reacción se sellan con una película selladora y se colocan. un baño de agua a 37°C o incubar en una incubadora durante 60 minutos.
5. Deseche la solución, seque con papel absorbente, inyecte la solución de lavado (350 μL) en cada pocillo, déjela reposar durante 1 minuto, sacuda la solución de lavado y seque con papel absorbente. el plato 5 veces (también puedes usar un lavaplatos para lavar el plato).
6. Añadir 50μL de sustrato A y B a cada pocillo e incubar a 37°C en oscuridad durante 15 minutos.
7. Agregue 50 μl de solución de parada a cada pocillo y mida el valor de DO de cada pocillo a una longitud de onda de 450 nm después de 15 minutos.
Cálculo de resultados experimentales
Utilice el valor de DO del estándar medido como abscisa y el valor de concentración del estándar como ordenada. Dibuje el estándar en papel cuadriculado o utilice el software correspondiente. Curva, obtenga la ecuación de regresión lineal, sustituya el valor de OD de la muestra en la ecuación y calcule la concentración de la muestra.
Rendimiento del kit
1. Rango de detección 0,75 ng/mL -?24 ng/mL.
2 Sensibilidad: la concentración de detección más baja es inferior a 0,1. ng/mL.
3. Especificidad: No presenta reactividad cruzada con otros análogos estructurales solubles.
4. Repetibilidad: el coeficiente de variación intraplaca es inferior al 10% y el coeficiente de variación entre placas es inferior al 15%.
Notas
1. Debido a las condiciones actuales y al nivel tecnológico, no es posible identificar y analizar exhaustivamente todas las materias primas proporcionadas por todos los proveedores. Este producto puede tener cierta calidad y calidad. riesgos técnicos.
2. Los resultados experimentales finales están estrechamente relacionados con la eficacia de los reactivos, las operaciones relevantes de los experimentadores y el entorno experimental en ese momento. Asegúrese de preparar suficientes muestras como respaldo.
3. Diferentes lotes del mismo producto pueden tener ligeras diferencias, como límite de detección, sensibilidad y tiempo de desarrollo del color, etc. Siga las instrucciones del kit para realizar el experimento. Las instrucciones electrónicas del sitio web son solo de referencia.
4. Sólo utilizando todos los reactivos del kit se puede garantizar el efecto de detección, no se pueden mezclar productos de otros fabricantes. Los mejores resultados sólo se pueden obtener siguiendo estrictamente las instrucciones de uso del kit.
Preguntas y respuestas
Si los resultados no son satisfactorios, tome una fotografía de los resultados del color, conserve los portaobjetos usados y los reactivos no utilizados y guárdelos adecuadamente, luego comuníquese con nuestro soporte técnico para resolver su problema. problemas. Mientras tanto, también puedes consultar la siguiente información:
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